Ohun elo sẹẹli Taara RT qPCR-Taqman Taara Cell Lysis Ẹjẹ Ṣetan Igbesẹ Ọkan-Igbese qRT-PCR Iwadi Awọn ohun elo
Awọn apejuwe
Ọja yii nlo eto ifasilẹ lysis alailẹgbẹ lati tusilẹ RNA ni kiakia lati awọn ayẹwo sẹẹli ti o gbin fun awọn aati RT-qPCR, imukuro ilana isọdọmọ akoko ati iṣẹ ṣiṣe RNA, ati pe awọn iṣẹju 7 nikan lati gba awoṣe RNA ti o nilo, pẹlu 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ti a pese nipasẹ ohun elo naa le gba akoko gidi-akoko PCR ni iyara ati ni imunadoko.
5 × Direct RT Mix ati 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ni ifarada inhibitor ti o lagbara ati pe o le ṣe atunṣe daradara ati imudara pato nipa lilo lysate ti ayẹwo lati ṣe iwọn bi awoṣe.Reageni ni Foregene Reverse Transcriptase, Gbona D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, eyi ti o le ṣee lo pẹlu lysis saarin lati ni kiakia ati irọrun ri awọn ayẹwo, ati ki o ni awọn abuda kan ti ga ifamọ, pato ati iduroṣinṣin.
Awọn pato
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Awọn paati ohun elo
| YiyaraTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Awọn paati ohun elo 20μl qPCR Reaction System | DRT-01021 | DRT-01022 | Akiyesi | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Apakan I | Ifipamọ CL | 4 milimita | 20 milimita | Cell Lysis |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 milimita | ||
| Buffer ST | 400 milimita | 1 milimita × 2 | ||
|
Apakan II | DNA eraser | 80 μl | 400 milimita | |
| 5× Adapọ RT Taara * | 160 milimita | 800 milimita | RT | |
| 2× Taara qPCR Mix-Taqman * | 1 milimita × 2 | 1.7 milimita × 6 | qPCR | |
| 20× ROX Itọkasi Dye | 40 μl | 200 milimita | ||
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita | 10 milimita | ||
| Ilana itọnisọna | 1 nkan | 1 nkan | ||
*:Cell Lysis, 5× Direct RT Mix, 2× Taara qPCR Mix-Taqman le ṣee ra lọtọ
Awọn ẹya & awọn anfani
■Rọrun ati imunadoko: pẹlu imọ-ẹrọ Cell Direct RT, awọn ayẹwo RNA le gba ni iṣẹju 7 nikan.
■ Ibeere ayẹwo jẹ kekere, bi kekere bi awọn sẹẹli 10 le ṣe idanwo.
■ Imujade giga: o le ṣe awari RNA ni kiakia ninu awọn sẹẹli ti a gbin ni 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ Eraser DNA le yara yọ awọn genomes ti a ti tu silẹ, dinku pupọ ni ipa lori awọn abajade idanwo ti o tẹle.
■ Iṣapeye RT ati eto qPCR jẹ ki ifasilẹ ipadasẹhin-igbesẹ meji RT-PCR ṣiṣẹ daradara ati PCR ni pato diẹ sii, ati diẹ sii sooro si awọn inhibitors ifasẹyin RT-qPCR.
Ohun elo Kit
Dopin ti ohun elo: gbin ẹyin.
- RNA ti a tu silẹ nipasẹ lysis ayẹwo: nikan wulo si awoṣe RT-qPCR ti ohun elo yii.
- Ohun elo naa le ṣee lo fun awọn idi wọnyi: itupalẹ ikosile jiini, ijẹrisi ti ipa ipalọlọ jiini-ilaja siRNA, ibojuwo oogun, ati bẹbẹ lọ.
Ibi ipamọ ati igbesi aye Selifu
Apa I ti kit yii yẹ ki o wa ni ipamọ ni 4℃;Apa II yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20 ℃.
Foregene Protease Plus II yẹ ki o wa ni ipamọ ni 4℃, ma ṣe di ni -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20℃ninu okunkun;ti o ba lo nigbagbogbo, o tun le wa ni ipamọ ni 4℃ fun ibi ipamọ igba kukuru (lo laarin awọn ọjọ 10).
Real Time PCR alakoko oniru agbekale
Siwaju Alakoko ati Yiyipada Alakoko
Fun Real Time PCR, apẹrẹ alakoko jẹ pataki pupọ.Awọn alakoko jẹ ibatan si pato ati ṣiṣe ti imudara PCR, ati pe o le ṣe apẹrẹ pẹlu itọkasi awọn ipilẹ wọnyi:
- Alakoko ipari: 18-30bp.
- GC akoonu: 40-60%.
- Iye Tm: sọfitiwia apẹrẹ alakoko, gẹgẹbi alakoko 5, le fun iye Tm ti alakoko.Awọn iye Tm ti oke ati isalẹ awọn alakoko yẹ ki o wa ni isunmọ bi o ti ṣee ṣe.Ilana iṣiro Tm tun le ṣee lo: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nigbati o ba n ṣiṣẹ PCR, iwọn otutu ti o wa ni isalẹ iye Tm alakoko ti 5 °C ni a yan ni gbogbogbo bi iwọn otutu annealing (ilosoke ti o baamu ni iwọn otutu annealing le mu iyasọtọ ti iṣe PCR pọ si).
- Awọn alakoko ati awọn ọja PCR:
- Apẹrẹ alakoko PCR ipari ọja ipari jẹ pelu 100-150bp.
- Awọn alakoko apẹrẹ ni agbegbe igbekalẹ Atẹle ti awoṣe yẹ ki o yago fun bi o ti ṣee ṣe.
- Yago fun dida 2 tabi diẹ sii awọn ipilẹ ibaramu laarin awọn opin 3′ ti oke ati awọn alakoko isalẹ.
- Alakoko 3′ ipilẹ ebute ko le wa pẹlu 3 afikun itẹlera G tabi C.
- Awọn alakoko funrara wọn ko le ni awọn ẹya ibaramu, bibẹẹkọ eto irun ori kan yoo ṣẹda, ti o kan imudara PCR.
- ATCG yẹ ki o pin kaakiri bi o ti ṣee ṣe ni ọna alakoko, ati ipilẹ ebute 3′ yẹ ki o yago fun bi T.
Àfikún1:Cell DirectRT-qPCR Apo kompont afikun akopọ
1.Cell Lysis Solusan
| Cell Lysis Solusan | |||
| Awọn paati ohun elo (24-daraga lysis eto / daradara) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| ApakanI | Ifipamọ CL | 20 milimita | 100 milimita |
| Foregene Protease Plus II | 400 milimita | 1 milimita × 2 | |
| Buffer ST | 1 milimita × 2 | 10 milimita | |
| ApakanII | DNA eraser | 400 milimita | 1 milimita × 2 |
| Apapo RT | |
| Awọn paati ohun elo (20 μl eto esi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Taara RT Mix | 800 milimita |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita × 2 |
| qPCR Apapo | ||
| Awọn paati ohun elo (20 μl eto esi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Taara qPCR Mix-Taqman | 1 milimita × 2 | 1.7 milimita × 6 |
| 20× ROX Itọkasi Dye | 40 μl | 200 milimita |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita | 10 milimita |
Awọn itọnisọna itọnisọna:
