Ko si awọn ifihan agbara ampilifaya

1.Taq DNA Polymerase ninu kit naa padanu iṣẹ rẹ nitori ibi ipamọ ti ko tọ tabi ipari ti ohun elo naa.
Iṣeduro: Jẹrisi awọn ipo ipamọ ti ohun elo;tun fi iye ti o yẹ ti Taq DNA Polymerase kun si eto PCR tabi ra Apo PCR Akoko Gidi tuntun fun awọn adanwo ti o jọmọ.

2.There ni o wa kan pupo ti inhibitors ti Taq DNA Polymerase ni DNA awoṣe.
Imọran: Tun awoṣe di mimọ tabi dinku iye awoṣe ti a lo.

3.The Mg2 + fojusi ko dara.
Iṣeduro: Idojukọ Mg2 + ti the2 × Real PCR Mix ti a pese jẹ 3.5mM.Sibẹsibẹ, fun diẹ ninu awọn alakoko pataki ati awọn awoṣe, ifọkansi Mg2+ le ga julọ.Nitorinaa, o le ṣafikun MgCl2 taara lati mu ifọkansi Mg2+ pọ si.O ti wa ni niyanju lati mu awọn Mg2+ 0.5mM kọọkan akoko fun iṣapeye.

4.The PCR amplification ipo ni o wa ko dara, ati awọn alakoko ọkọọkan tabi fojusi jẹ aibojumu.
Imọran: jẹrisi deede ti ọna alakoko ati alakoko ko ti bajẹ;ti ifihan agbara ko ba dara, gbiyanju lati dinku iwọn otutu annealing ki o ṣatunṣe ifọkansi alakoko ni deede.

5.The iye ti awoṣe jẹ ju kekere tabi ju Elo.
Iṣeduro: Ṣe itọpo dilution linearization awoṣe, ki o yan ifọkansi awoṣe pẹlu ipa PCR ti o dara julọ fun idanwo PCR Akoko Gidi.

NTC ni iye fluorescence ti o ga ju

1.Reagent kontaminesonu ṣẹlẹ nigba isẹ ti.
Iṣeduro: Rọpo pẹlu awọn reagents tuntun fun awọn adanwo PCR Akoko gidi.

2.Contamination waye lakoko igbaradi ti eto ifasilẹ PCR.
Iṣeduro: Mu awọn igbese aabo to ṣe pataki lakoko iṣẹ, gẹgẹbi: wọ awọn ibọwọ latex, lilo itọpa pipette pẹlu àlẹmọ, ati bẹbẹ lọ.

3.Awọn alakoko ti wa ni idinku, ati awọn ibajẹ ti awọn alakoko yoo fa iṣeduro ti kii ṣe pato.
Imọran: Lo SDS-PAGE electrophoresis lati rii boya awọn alakoko ti bajẹ, ki o rọpo wọn pẹlu awọn alakoko tuntun fun awọn adanwo PCR Akoko Gidi.

Alakoko dimer tabi ti kii-kan pato ampilifaya

1.The Mg2 + fojusi ko dara.
Iṣeduro: Idojukọ Mg2 + ti 2 × Real PCR EasyTM Mix ti a pese jẹ 3.5 mM.Sibẹsibẹ, fun diẹ ninu awọn alakoko pataki ati awọn awoṣe, ifọkansi Mg2+ le ga julọ.Nitorinaa, o le ṣafikun MgCl2 taara lati mu ifọkansi Mg2+ pọ si.O ti wa ni niyanju lati mu awọn Mg2+ 0.5mM kọọkan akoko fun iṣapeye.

2.The PCR annealing otutu jẹ ju kekere.
Imọran: Mu iwọn otutu annealing PCR pọ nipasẹ 1℃ tabi 2℃ ni igba kọọkan.

3.The PCR ọja jẹ gun ju.
Iṣeduro: Gigun ọja PCR Real Time yẹ ki o wa laarin 100-150bp, ko ju 500bp lọ.

4.Awọn alakoko ti wa ni idinku, ati ibajẹ ti awọn alakoko yoo ja si ifarahan ti imudara pato.
Imọran: Lo SDS-PAGE electrophoresis lati rii boya awọn alakoko ti bajẹ, ki o rọpo wọn pẹlu awọn alakoko tuntun fun awọn adanwo PCR Akoko Gidi.

5.The PCR eto jẹ aibojumu, tabi awọn eto jẹ ju kekere.
Imọran: Eto ifasilẹ PCR ti kere ju yoo jẹ ki išedede wiwa dinku.O dara julọ lati lo eto ifaseyin ti a ṣeduro nipasẹ ohun elo PCR pipo lati tun-ṣe idanwo PCR Akoko Gidi.

Atunṣe ti ko dara ti awọn iye iwọn

1.The irinse ti wa ni malfunctioning.
Aba: Awọn aṣiṣe le wa laarin iho PCR kọọkan ti ohun elo, ti o mu abajade atunṣe ko dara lakoko iṣakoso iwọn otutu tabi wiwa.Jọwọ ṣayẹwo ni ibamu si awọn ilana ti ohun elo ti o baamu.

2.The ayẹwo ti nw ni ko dara.
Iṣeduro: Awọn ayẹwo alaimọ yoo ja si atunṣe ti ko dara ti idanwo naa, eyiti o pẹlu mimọ ti awoṣe ati awọn alakoko.O ti wa ni ti o dara ju lati tun awọn awoṣe, ati awọn alakoko ti wa ni ti o dara ju wẹ nipa SDS-PAGE.

3.The PCR eto igbaradi ati akoko ipamọ jẹ gun ju.
Imọran: Lo eto PCR Akoko Gidi fun idanwo PCR lẹsẹkẹsẹ lẹhin igbaradi, maṣe fi silẹ fun igba pipẹ.

4.The PCR amplification ipo ni o wa ko dara, ati awọn alakoko ọkọọkan tabi fojusi jẹ aibojumu.
Imọran: jẹrisi deede ti ọna alakoko ati alakoko ko ti bajẹ;ti ifihan agbara ko ba dara, gbiyanju lati dinku iwọn otutu annealing ki o ṣatunṣe ifọkansi alakoko ni deede.

5.The PCR eto jẹ aibojumu, tabi awọn eto jẹ ju kekere.
Imọran: Eto ifasilẹ PCR ti kere ju yoo jẹ ki išedede wiwa dinku.O dara julọ lati lo eto ifaseyin ti a ṣeduro nipasẹ ohun elo PCR pipo lati tun-ṣe idanwo PCR Akoko Gidi.