PCR Taara jẹ ifa ti o lo ẹranko tabi awọn ohun ọgbin taara fun imudara laisi isediwon acid nucleic.Ni ọpọlọpọ awọn ọna, PCR taara ṣiṣẹ bi PCR deede

Iyatọ akọkọ ni ifipamọ aṣa ti a lo ni PCR taara, apẹẹrẹ le jẹ itẹriba taara si ifa PCR laisi isediwon acid nucleic, ṣugbọn awọn ibeere ti o baamu wa fun ifarada ti awọn enzymu ati ibamu ti ifipamọ ti o ni ipa ninu iṣe PCR taara.

Botilẹjẹpe awọn inhibitors PCR diẹ sii tabi kere si ni awọn apẹẹrẹ ti o wọpọ, PCR taara le tun ṣaṣeyọri imudara igbẹkẹle labẹ iṣe ti awọn enzymu ati awọn buffers.Idahun PCR ti aṣa nilo acid nucleic ti o ga julọ bi awoṣe, eyiti o le ṣe idiwọ ilọsiwaju didan ti iṣesi PCR ti awoṣe ba ni awọn ọlọjẹ ati awọn idoti miiran.PCR Taara lọwọlọwọ jẹ ọkan ninu awọn imọ-ẹrọ olokiki diẹ sii ni aaye ti awọn iwadii molikula.

01 PCR Taara ni akọkọ ti a lo fun ẹranko ati ọgbin

Ohun elo akọkọ ti PCR taara wa ni aaye ti awọn ẹranko ati awọn ohun ọgbin, gẹgẹbi ẹjẹ, ẹran ara ati irun ti eku, ologbo, adie, ehoro, agutan, malu, ati bẹbẹ lọ, awọn ewe ọgbin ati awọn irugbin, ati bẹbẹ lọ, ti a lo lati ṣe iwadii genotyping, transgenic, wiwa plasmid, itupalẹ Gene knockout, idanimọ orisun DNA, idanimọ eya, itupalẹ SNP ati awọn aaye miiran.

Awọn aaye wọnyi ni diẹ ninu awọn ẹya ti o wọpọ, iyẹn ni, akoonu jiini ti ibi-afẹde jẹ iwọn giga ati isediwon acid nucleic jẹ wahala, nitorinaa PCR taara ko le fi akoko pamọ nikan ati ni ipa kekere lori awọn abajade, ṣugbọn tun ṣafipamọ idiyele.

PCR Taara ti a lo fun wiwa pathogen jẹ ọrọ ti awọn ọdun aipẹ, diẹ ninu awọn aṣelọpọ reagent PCR ti ṣe ọpọlọpọ awọn ipa ni itọsọna yii nigbati o ba n ṣe imotuntun.Paapaa ninu ajakale-arun COVID-19 yii, ọpọlọpọ iru awọn ọja wiwa ti han lori ọja, gẹgẹ bi Apo Iwari Acid Nucleic Acid SARS-CoV-2 (Ọna Ilana Fluorescent Multiplex PCR) ti ṣe iwadii ati idagbasoke nipasẹ Foregene, eyiti o nlo imọ-ẹrọ RT PCR akoko-gidi (rRT-PCR) fun iṣawari didara ti SARS-CoV-2 ninu ayẹwo nucleic acids ti eniyan.

Foregene jẹ ọkan ninu awọn ile-iṣẹ ti nlo imọ-ẹrọ PCR Taara, fun wiwa deede ORF1ab, N, E, atiiyatọ lineages nucleic acids ni eda eniyan nasopharyngeal tabi oropharyngeal swab awọn ayẹwo bi SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) ati P.1 lineage (BR).

02  Reagents nilo fun taara PCR

Ayẹwo Lysate

Awọn ayẹwo lysate le ti wa ni tunto nipa ara re tabi ra.Iyatọ ti akopọ ti awọn ami iyasọtọ ti lysate yoo jẹ ki agbara eke yatọ, ati lẹhinna akoko irọra yoo jẹ iyatọ diẹ.Fun apẹẹrẹ, fun igbaradi ti awọn ayẹwo ẹran ara ẹran, awọn iṣẹju 30 tabi lysis alẹ ni a ṣe iṣeduro ni gbogbogbo, ati ojutu lysis fun awọn ọlọjẹ wa lati iṣẹju 3-10.

PCR titunto si mix

A ṣe iṣeduro lati lo DNA polymerase ti o bẹrẹ lati mu imudara kan pato pọ si ati mu agbara imudara pọ si.Pataki ti PCR taara jẹ polymerase ti o ni ifarada pupọ.

Imukuro tabi dojuti awọn paati ninu ayẹwo ti o ni ipa lori imudara DNA

Lẹhin ti a ṣe ayẹwo ayẹwo pẹlu lysate, awọn ọlọjẹ, awọn lipids ati awọn idoti sẹẹli miiran yoo tu silẹ, awọn nkan wọnyi yoo dẹkun iṣesi PCR.Nitorinaa, PCR taara nilo afikun yiyọ ti o baamu tabi awọn inhibitors lati dinku ipa ti awọn nkan wọnyi.

03  Akojọpọ ti awọn aaye imọ marun ti PCR taara

Ni akọkọ, imọ-ẹrọ PCR Taara jẹ imọ-ẹrọ PCR taara fun ọpọlọpọ awọn ayẹwo ti ibi.Labẹ ipo imọ-ẹrọ yii, ko si iwulo lati yapa ati jade kuro ninu acid nucleic, lo taara ni ayẹwo àsopọ bi ohun naa, ati ṣafikun awọn alakoko jiini ibi-afẹde ni lati ṣe iṣe PCR.

Ẹlẹẹkeji, imọ-ẹrọ PCR Taara kii ṣe imọ-ẹrọ imudara awoṣe DNA ibile nikan, ṣugbọn tun pẹlu awoṣe RNA yiyipada PCR transcription.

Kẹta, imọ-ẹrọ PCR Taara kii ṣe taara taara awọn aati PCR didara deede lori awọn ayẹwo ti ara, ṣugbọn tun pẹlu awọn aati qPCR Real-Time, eyiti o nilo eto ifaseyin lati ni agbara kikọlu ipadanu ipadalẹ to lagbara ati fifẹ fluorescence endogenous pa agbara atako.

Ẹkẹrin, awọn ayẹwo ti a fojusi nipasẹ imọ-ẹrọ PCR Taara nikan nilo itusilẹ ti awọn awoṣe acid nucleic, ati pe ko yọ awọn ọlọjẹ, polysaccharides, ions iyọ, ati bẹbẹ lọ ti o dabaru pẹlu iṣesi PCR.Eyi ti o nilo polymerase acid nucleic ati PCR Mix ninu eto ifaseyin lati ni atako to dara julọ ati ibaramu lati rii daju iṣẹ ṣiṣe henensiamu ati deede ẹda labẹ awọn ipo eka.

Karun, awọn àsopọ ayẹwo ìfọkànsí nipa Direct PCR ọna lai eyikeyi nucleic acid itọju imudara ati iye ti awoṣe jẹ gidigidi kekere, eyi ti o nbeere awọn lenu eto lati ni lalailopinpin giga ifamọ ati ampilifaya ṣiṣe.