RNase jẹ ọrọ ifarabalẹ ti ọpọlọpọ awọn ọmọ ile-iwe ti o ṣe awọn adanwo isediwon RNA nigbagbogbo ko fẹ gbọ.Ni ihamọra ni kikun, RNA ti o jade nikẹhin pẹlu awọn reagents majele ti ga julọ phenol ati chloroform ti bajẹ.Emi ko laja!!!Loni, jẹ ki a wo orisun ti Rnase olokiki.

Ribonuclease (RNase), tabi RNase, jẹ iparun ti o le ṣe hydrolyze RNA sinu awọn ohun elo kekere.RNase, gẹgẹbi amuaradagba moleku kekere kan, jẹ iduroṣinṣin lainidii .Iwọn otutu giga ti aṣa ati sterilization nya si titẹ giga ati awọn inhibitors protein ko le mu ṣiṣẹ patapata.Iduroṣinṣin ti RNase ni akọkọ wa lati awọn iwe ifowopamosi disulfide ninu eto naa.Fun apẹẹrẹ, RNase ti o wọpọ ti pancreas ni amino acids 124 nikan, ṣugbọn o ni awọn ifunmọ disulfide mẹrin ninu.Efin efin ati disulfide mnu funni RNase pẹlu iduroṣinṣin igbona to dara julọ.Ni afikun, rnase ni iwuwo molikula kekere ti o jo ati pe o le yara mu imupadabọ atilẹba rẹ pada ni ọpọlọpọ awọn ọran.

Ni afikun si iduroṣinṣin to gaju,RNases wa ni ibi gbogbo ninu yàrá .RNase ni a ti ibi olugbeja siseto.Fun sẹẹli kan, RNA exogenous nigbagbogbo jẹ apaniyan.Ti a bawe pẹlu DNA exogenous, RNA exogenous nigbagbogbo lewu diẹ sii.RNA ti wa ni inudidun transcrited ati ki o tumo, ki fere gbogbo oganisimu ti wa RNases lati dabobo lodi si awọn ayabo ti exogenous RNA.Nitorinaa, awọn sẹẹli kokoro-arun ti a gbin ni ile-iyẹwu ati iwọ ti o jade RNA yọ oorun didun RNase jade.Awọn omi ara eniyan (tọọ, omije, ati bẹbẹ lọ) ni iye nla ti RNase ninu, nitorinaa maṣe sọkun nigbati RNA ba bajẹ.Bi o ṣe nkigbe, ibajẹ RNA buru si!!Arabinrin Daiyu ko dara fun isediwon RNA!

Ni afikun, awọ elege rẹ tun ni ọpọlọpọ RNase ninu, ati awọn asami, pipettes, awọn ilẹkun firiji, ati awọn ọwọ ilẹkun ti awọ ti fi ọwọ kan tun ni RNase ninu.

Pẹlu ọpọlọpọ rambling, jẹ ki a wo bi a ṣe le ṣe pẹlu RNases.

Ohun akọkọ ti gbogbo eniyan ronu nigbati o yọ RNA kuro niDEPC(dietyl pyrocarbonate).DEPC nipataki denatures awọn amuaradagba nipa apapọ pẹlu imidazole oruka ti awọn RNase lọwọ ẹgbẹ histidine, nitorina idilọwọ awọn iṣẹ-ṣiṣe ti awọn henensiamu.0.1%.

Fun RNase, a nilo lati bẹrẹ lati awọn aaye meji,akọkọ ni lati ṣe idiwọ iṣẹ-ṣiṣe ti RNase endogenous

Awọn reagents isediwon RNA ti aṣa bii guanidine isothiocyanate ati DTT ti o wa ninu Trizol le ṣii iwe adehun disulfide ti RNase, ṣugbọn awọn RNases tun wa, paapaa ni awọn ayẹwo awọ ara, nitorinaa ṣe akiyesi si iwọn otutu kekere.

1.Lẹsẹkẹsẹ ibọmi ayẹwo àsopọ sinu nitrogen olomi lẹhin gbigbe jade, tabi ni ojutu itọju RNA ti iṣowo.

2.Lẹhin yiyọ RNA ti ayẹwo sẹẹli, ṣafikun si ojutu lysis ati lyse lori apoti yinyin

3. O dara julọ lati lo omi nitrogen fun lilọ nigba ti àsopọ ayẹwo ti wa ni homogenized.Nigbati o ba nlo homogenizer ina laisi nitrogen olomi, san ifojusi si itutu agbaiye ni kikun ohun ti nmu badọgba homogenate.

Ekeji jẹ exogenous DNAse

1.Ṣe ihamọra ni kikun, wọ aṣọ laabu kan, wọ iboju-boju, ki o rii daju pe o wọ bata ti awọn ibọwọ tuntun (maṣe jẹ arosọ!

2.Gbogbo awọn imọran pipette ti a lo, awọn tubes EP, awọn tubes PCR ati awọn ohun elo miiran gbọdọ jẹ itọju de-RNase.O le jẹ sinu 0.1% DEPC ati lẹhinna tẹ labẹ titẹ giga.San ifojusi si isẹ ti o wa ninu iho eefin kan.Awọn apanilaya agbegbe le ra taara awọn ohun elo fun yiyọ awọn enzymu kuro.

PS: Jẹ ki n sọ ọna ọlẹ kan fun ọ.Botilẹjẹpe iwọn otutu giga ati titẹ giga ko le yọ RNase kuro patapata, yoo yọ apakan nla rẹ kuro.Awọn akoko 2 ti iwọn otutu giga ati titẹ giga ni ipa ti o dara, ati isediwon ti RNA ni ipa diẹ.

3.Oti le denature awọn ọlọjẹ,nitorina tabili isediwon RNA le parun pẹlu ọti 75%. , ati awọn ibọwọ le tun ti wa ni sprayed pẹlu oti.

4.Ojutu itusilẹ RNA ikẹhin ati tube centrifuge yẹ ki o tun ṣe itọju de-RNase.Omi DEPC jẹ ojuutu itusilẹ RNA ti o wọpọ.Jẹ ki a sọrọ nipa ọna igbaradi ti o pe ti omi DEPC (ranti lati tun ṣajọpọ DEPC ti iṣowo nigbati o ra)

Fi DEPC kun omi ultrapure ni 1: 1000, gbọn daradara, jẹ ki o duro ni alẹ ni 37 ° C, ki o si sterilize ni 121 ° C labẹ iwọn otutu giga ati titẹ giga fun awọn iṣẹju 15.Omi DEPC le wa ni ipamọ ni -20°C ni 1ml aliquots.

Lakotan, lati ṣe akopọ: iwọn otutu kekere jẹ bọtini, awọn ohun elo ti wa ni itọju daradara, ni kikun ihamọra ati ọrọ ti o dinku!

O dara, iyẹn ni fun ete oni.Mo fẹ ki o ni gbogbo ifọkansi RNA ati mimọ ti o mẹnuba.Mejeeji A260 / A280 jẹ 2.0!!!

Dajudaju, ti o ba lo ayara otutu isẹ RNA isediwon kit, o le ma ba pade awọn iṣoro ti o wa loke.

Ṣiṣẹ ni iwọn otutu yara, laisi fifi DNA kun, yọkuro RNA lapapọ lati awọn sẹẹli ni iṣẹju 11, ati yọkuro RNA lapapọ lati awọn ẹran ara ẹranko tabi awọn ohun ọgbin ni iṣẹju 30.

Fun awọn ayẹwo idanwo, jọwọ kan si:overseas@foregene.com

Awọn ọja ti o jọmọ:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/