Asiwaju

RNA ti kii ṣe ifaminsi gigun, lncRNA jẹ RNA ti kii ṣe ifaminsi pẹlu ipari ti o tobi ju 200 nucleotides, ni gbogbogbo laarin 200-100000 NT.lncRNA n ṣe ilana ikosile jiini ni epigenetic, transcription ati awọn ipele transcriptional, ati kopa ninu ipalọlọ X chromosome, imudani genome ati iyipada chromatin, imuṣiṣẹ transcription, kikọlu transcription, irinna iparun, ilana ilana ọmọ sẹẹli, ilana iyatọ sẹẹli, ati awọn ipa isanpada iwọn lilo miiran ti o ni ibatan si awọn ilana isọdọkan, ati ọpọlọpọ awọn ilana isọdọtun ti o ni ibatan si eniyan. ati pe o jẹ ọkan ninu awọn aaye ti o gbona ni aaye ti biomedicine.

01  Awọn oriṣi ati awọn abuda ti LncRNA

lncRNA ti pin si ọpọlọpọ awọn oriṣi ni ibamu si awọn orisun oriṣiriṣi ti idasile rẹ, bi o ṣe han ninu eeya loke.O ni awọn abuda wọnyi:

1. lncRNAs maa n gun, pẹlu ikosile ti o ni agbara ati awọn ọna splicing ti o yatọ nigba iyatọ
2. Ti a bawe pẹlu awọn jiini ifaminsi, lncRNA nigbagbogbo ni ipele ikosile kekere
3. Pupọ lncRNAs ni akoko ti o han gbangba ati iyasọtọ ikosile aaye ninu ilana ti iyatọ ti ara ati idagbasoke
4. Nibẹ ni o wa ti iwa expressions ni èèmọ ati awọn miiran arun
5. Awọn ipo subcellular ti lncRNA yatọ
6. Awọn ọkọọkan jẹ kekere ni itoju, ṣugbọn awọn iṣẹ ni o ni kan awọn ìyí ti itoju, ati be be lo.

02 Awọn ibeere Nigbagbogbo nipa Iyipada Iyipada LncRNA

Nitori akoonu kekere ti lncRNA ninu awọn sẹẹli, gigun gigun ati igbekalẹ ipele giga, iru RNA nigbagbogbo ni awọn ẹya eka gẹgẹbi awọn losiwajulosehin stem tabi awọn irun irun, ati RT-qPCR jẹ itara si awọn iṣoro ti iyipada iyipada ti ko ni aṣeyọri tabi ṣiṣe kekere.

03 Ojutu transcription yiyipada LncRNA

Ninu ofin aringbungbun, ilana ti awọn ọlọjẹ RNA nipa lilo transcriptase yiyipada tiwọn lati ṣajọpọ DNA nipa lilo RNA gẹgẹbi awoṣe ni a pe ni transcription yiyipada.Ilana lilo kokoro RNA yiyipada transcriptase lati ṣapọpọ awoṣe cDNA ni fitiro ni a npe ni transcription yiyipada.Awọn eroja akọkọ ti o wa ninu eto transcription yiyipada: awoṣe RNA, iyipada transcriptase, awọn alakoko ati awọn paati miiran.

1.RNA awoṣe

Ipa ti awoṣe RNA lori iyipada iyipada jẹ afihan ninu eto rẹ, mimọ ati iduroṣinṣin.Ti o ga ni mimọ ati iduroṣinṣin ti RNA ti o jade, ṣiṣe ti o ga julọ ti transcription yiyipada ati pe deede diẹ sii awọn abajade pipo ti o tẹle.RNA ti a sọ di mimọ nipasẹ awọn isọdọtun isediwon RNA ti a lo nigbagbogbo nigbagbogbo ni awọn iyokuro ti ọti ati awọn iyọ guanidine, eyiti o ni ipa idilọwọ to lagbara lori pupọ julọ transcriptase.

2.Reverse transcriptase

Iyipada transcriptase ni ipa bọtini ninu gbogbo eto ifasilẹyin.Iwọn otutu ti o yẹ fun iyipada transcriptase ti a lo ninu ọpọlọpọ awọn ile-iṣere jẹ gbogbogbo 42°C.Ni otitọ, ṣiṣi ti eto RNA giga-giga nilo iwọn otutu ti o ga julọ, ati awọn ibeere fun transscriptase yiyipada ga julọ.

3.Alakoko

Awọn alakoko transcription yiyipada pẹlu awọn alakoko kan pato-jiini, awọn alakoko laileto ati awọn alakoko Oligo dT.Pupọ awọn lncRNA ko ni awọn iru polyA ninu, ati pe o ṣe pataki lati baamu deede awọn alakoko laileto pẹlu Oligo dT.

4.Awọn ẹya ara ẹrọ miiran

Ni wiwo otitọ pe RNA rọrun paapaa lati dinku, iṣafihan awọn paati ninu eto transcription yiyipada le dinku, eyiti o le ṣe idiwọ titẹsi RNase ni imunadoko ati rii daju ilọsiwaju didan ti transcription yiyipada.

Foregenegba lati awoṣe RNA, yiyipada transcription si qPCR

Ni kikun ṣamọna wiwa lncRNA rẹ

Apapọ Eranko RNA IipinyaApo (pẹlu ọwọn yiyọ gDNA)

Apapọ sẹẹli RNA IipinyaApo (pẹlu ọwọn yiyọ gDNA)

Lnc-RT AkikanjuTM I (Pẹlu gDNase) (Super Premix fun iṣelọpọ cDNA akọkọ-okun lati lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aawọn anfani ofIyọkuro RNA:

Ohun elo naa nlo imọ-ẹrọ isediwon RNA iran-kẹta, ko si iwulo lati lo DNAse.

Awọn iṣẹju 11 lati 96, 24, 12, ati 6-daradara awọn sẹẹli gbin awo, isediwon iṣẹ ṣiṣe giga ti gDNA-ọfẹ, mimọ-giga, didara giga lapapọ sẹẹli RNA.

Awọn anfani ti lncRNA yiyipada transcription:

Eto transcription yiyipada ni idagbasoke pataki fun LncRNA lati yọkuro ibajẹ DNA jinomiki ni kiakia.

Eto transcription yiyipada ni iduroṣinṣin igbona giga ati pe o tun ni iṣẹ iṣipopada ti o dara ni 50°C.

Awọn awoṣe pẹlu akoonu GC giga ati eto ile-ẹkọ keji ti o nipọn le jẹ iyipada pẹlu ṣiṣe giga.

Awọn anfaniof qPCR:

Ibẹrẹ gbigbona Foregene Taq Polymerase ni ṣiṣe imudara ti o ga julọ, ifamọ imudara ti o ga julọ, ati iyasọtọ imudara ti o ga julọ

Iṣapeye Real PCR Easy Mix jẹ ki SYBR Green Mo ni ifamọ wiwa ti o ga julọ, ati kikankikan fluorescence rẹ jẹ awọn akoko 3-5 ti awọn ọja ti o jọra, eyiti o le pade awọn iwulo ti awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi awọn adanwo pipo fluorescence.