Ọpọlọpọ awọn idasilẹ rogbodiyan ninu itan-akọọlẹ ti imọ-ẹrọ iṣawari ninu ọkan mi jẹ imọ-ẹrọ ajẹsara ti o da lori ipilẹ ti abuda antigen-antibody ni pato, imọ-ẹrọ PCR ati imọ-ẹrọ atẹle.Loni a yoo sọrọ nipa imọ-ẹrọ PCR.Gẹgẹbi itankalẹ ti imọ-ẹrọ PCR, awọn eniyan deede pin imọ-ẹrọ PCR si awọn iran mẹta: imọ-ẹrọ PCR lasan, imọ-ẹrọ pipo fluorescent ti PCR ati imọ-ẹrọ PCR oni-nọmba.
Common PCR ilana
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis ṣe idawọle polymerase chain reaction (polymerase chain reaction, PCR) ni ọdun 1983. A sọ pe nigbati o wakọ ọrẹbinrin rẹ, lojiji o ni filasi ti awokose ati ero ti ilana PCR (lori awọn anfani ti awakọ).Kary Mullis ni a fun un ni Ebun Nobel ninu Kemistri ni ọdun 1993. The New York Times sọ asọye: “Ipilẹṣẹ ti o ga julọ ati pataki, o fẹrẹ pin pinpin isedale si awọn akoko iṣaaju PCR ati lẹhin PCR.
Awọn opo ti PCR: Labẹ awọn catalysis ti DNA polymerase, iya okun DNA ti wa ni lo bi awọn awoṣe, ati awọn kan pato alakoko ti lo bi awọn ibẹrẹ ojuami ti itẹsiwaju, ati awọn ọmọbinrin okun DNA tobaramu si iya okun awoṣe DNA ti wa ni dakọ ni fitiro nipasẹ denaturation, annealing, itẹsiwaju ati awọn miiran awọn igbesẹ ti.O jẹ imọ-ẹrọ imudara imudara DNA ni fitiro, eyiti o le ni iyara ati ni pataki lati pọsi eyikeyi DNA ibi-afẹde ni fitiro.
Awọn anfani ti PCR deede
1.Classic ọna, pipe okeere ati abele awọn ajohunše
2.Isalẹ iye owo ti irinse reagents
3.Awọn ọja PCR le gba pada fun awọn adanwo isedale molikula miiran
Iṣeduro Foregene PCR ẹrọ: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Awọn ọja ti o jọmọ: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Awọn alailanfani ti PCR deede
1.rọrun lati idoti
2.cumbersome isẹ
3.nikan ti agbara onínọmbà
4.Ibanujẹ iwọntunwọnsi
5.Imudara ti ko ni pato, ati nigbati ẹgbẹ ti kii ṣe pato jẹ iwọn kanna bi ẹgbẹ ibi-afẹde, ko le ṣe iyatọ
CPCR ti o da lori apillary electrophoresis
Ni idahun si awọn ailagbara ti PCR arinrin, diẹ ninu awọn aṣelọpọ ti ṣafihan awọn ohun elo ti o da lori ipilẹ ti electrophoresis capillary.Igbesẹ electrophoresis lẹhin imudara PCR ti pari ni capillary.Ifamọ jẹ ti o ga julọ, ati iyatọ ti awọn ipilẹ pupọ le ṣe iyatọ ati imudara le ṣe iṣiro nipasẹ MAERKER.ọja akoonu.Aila-nfani ni pe ọja PCR tun nilo lati ṣii ati fi sinu ohun elo naa, ati pe eewu nla tun wa ti ibajẹ.
CapillaryElectrophoresis
2. Imọ-ẹrọ pipo Fuluorisenti gidi-akoko PCR (Pregiant Real-akoko PCR, qPCR) imọ-ẹrọFluorescent pipo PCR, tun npe ni Real-Time PCR, jẹ titun kan nucleic acid pipo ọna ẹrọ ni idagbasoke nipasẹ PE (Perkin Elmer) ni 1995. Awọn itan ti idagbasoke ti fluorescent pipo PCR ni a itan ti ọkàn-igbega sisegun ti awọn omiran bi ABI, Roche, ati Bio-Rad.Ti o ba nifẹ, o le ṣayẹwo.Ilana yii jẹ lọwọlọwọ ti o dagba julọ ati ilana PCR ologbele-pipo lilo pupọ.
Ti ṣe iṣeduro ẹrọ qPCR:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Ọna dye Fuluorisenti (SYBR Green I):SYBR Green I jẹ awọ abuda DNA ti o wọpọ julọ fun PCR pipo, eyiti o so ti kii ṣe ni pato si DNA oni-meji.Ni ipinle ọfẹ, SYBR Green n jade ni ailera fluorescence, ṣugbọn ni kete ti a dè si DNA ti o ni ilọpo meji, itanna rẹ pọ si 1000-agbo.Nitorinaa, ifihan agbara Fuluorisenti lapapọ ti o jade nipasẹ iṣesi jẹ iwọn si iye DNA ti o ni okun meji ti o wa ati pe yoo pọ si pẹlu ilosoke ọja imudara.Níwọ̀n bí àwọ̀ náà ti so pọ̀ mọ́ DNA onílọ̀po méjì, àwọn àbájáde rere èké lè jẹ́ ti ipilẹṣẹ.
Awọn ọja ti o jọmọ: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Fuluorisenti ibere ọna (ọna ẹrọ Taqman): NigbaPCR ampilifaya, kan pato Fuluorisenti ibere wa ni afikun ni akoko kanna bi a bata ti alakoko.Iwadii jẹ oligonucleotide laini, pẹlu ẹgbẹ onirohin Fuluorisenti ati ẹgbẹ quencher fluorescent lẹsẹsẹ ti aami ni awọn opin mejeeji.Nigbati iwadii ba wa ni pipe, ifihan fluorescent ti o jade nipasẹ ẹgbẹ onirohin ti gba nipasẹ ẹgbẹ quencher, ati wiwa Ko si ifihan agbara fluorescent;nigba PCR ampilifaya (ni awọn itẹsiwaju ipele), awọn 5'-3' Dicer aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ti Taq ensaemusi yoo Daijesti ati degrade awọn ibere, ki awọn onirohin Fuluorisenti ẹgbẹ ati awọn quencher Fuluorisenti ẹgbẹ ti wa ni niya, ki awọn fluorescence monitoring eto Awọn fluorescent ifihan agbara le ti wa ni gba, ti o ni, ni gbogbo igba ti a DNA pq ti wa ni amúṣantóbi ti, a pipe awọn ifihan agbara ti fluorescent ti moleculation ti molecule ifihan agbara ti molecule. s ati awọn Ibiyi ti PCR awọn ọja.Ọna iwadii Taqman jẹ ọna wiwa ti o wọpọ julọ ni wiwa ile-iwosan.
Awọn ọja ti o jọmọ: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Awọn anfani ti qPCR
1.Ọna naa ti dagba ati ohun elo atilẹyin ati awọn reagents ti pari
2.Alabọde iye owo ti reagents
3.rọrun lati lo
4.Ga erin ifamọ ati ni pato
Awọn alailanfani ti qPCR
Iyipada ti jiini ibi-afẹde nyorisi wiwa ti o padanu.
Abajade wiwa ti awoṣe ifọkansi kekere ko le ṣe ipinnu.
Aṣiṣe nla wa nigba lilo ọna kika boṣewa fun wiwa titobi.
3. Digital PCR (digital PCR, dPCR) ọna ẹrọ
PCR oni nọmba jẹ ilana kan fun iwọn pipe ti awọn ohun elo acid nucleic.Ti a ṣe afiwe pẹlu qPCR, PCR oni-nọmba le ka taara nọmba awọn ohun elo DNA/RNA, eyiti o jẹ iwọn pipe ti awọn ohun elo acid nucleic ninu apẹẹrẹ ibẹrẹ.Ni ọdun 1999, Bert Vogelstein ati Kenneth W. Kin-zler dabaa imọran ti dPCR.
Ni ọdun 2006, Fluidigm ni akọkọ lati ṣe agbejade ohun elo dPCR ti o da lori chirún ti iṣowo.Ni 2009, Life Technologies ṣe ifilọlẹ OpenArray ati QuantStudio 12K Flex dPCR awọn ọna ṣiṣe.Ni ọdun 2013, Awọn Imọ-ẹrọ Igbesi aye ṣe ifilọlẹ eto QuantStudio 3DdPCR, eyiti o nlo imọ-ẹrọ chirún nanoscale microfluidic iwuwo giga lati pin awọn ayẹwo ni deede si awọn sẹẹli kọọkan 20,000.ni lenu daradara.
Ni ọdun 2011, Bio-Rad ṣe ifilọlẹ ohun elo QX100 dPCR ti o da lori droplet, eyiti o nlo imọ-ẹrọ omi-in-epo lati pin kaakiri ayẹwo ni deede si 20,000 droplet-water-in-epo, o si lo oluyẹwo droplet lati ṣe itupalẹ awọn isun omi.Ni ọdun 2012, RainDance ṣe ifilọlẹ ohun elo RainDrop dPCR, ti o wa nipasẹ gaasi ti o ga, lati pin eto ifaseyin boṣewa kọọkan sinu emulsion iṣesi ti o ni miliọnu kan si 10 million picoliter-ipele micro-droplets.
Titi di isisiyi, PCR oni-nọmba ti ṣẹda awọn ẹgbẹ pataki meji, iru chirún ati iru droplet.Laibikita iru PCR oni-nọmba, awọn ipilẹ ipilẹ rẹ jẹ opin dilution, PCR ipari ati pinpin Poisson.Eto ifaseyin PCR boṣewa ti o ni awọn awoṣe acid nucleic ti pin boṣeyẹ si ẹgbẹẹgbẹrun awọn aati PCR, eyiti o pin si awọn eerun igi tabi awọn microdroplets, nitorinaa iṣesi kọọkan ni bi o ti ṣee ṣe moleku awoṣe, ati pe awoṣe PCR kan-molecule kan ni a ṣe.Nipa kika fluorescence Iwaju tabi isansa ti ifihan naa ni a ka, ati pe iwọn pipe ni a ṣe lẹhin isọdiwọn pinpin Poisson iṣiro.
Awọn atẹle jẹ awọn abuda ti ọpọlọpọ awọn iru ẹrọ PCR oni nọmba ti Mo ti lo:
1. Bio-Rad QX200 droplet oni PCR Bio-RadQX200 jẹ ipilẹ PCR oni-nọmba oni-nọmba pupọ, ilana wiwa ipilẹ: Awọn ayẹwo 20,000 jẹ ipilẹṣẹ nipasẹ monomono droplet Omi-in-epo micro-droplets ti wa ni imudara lori ẹrọ PCR lasan, ati nikẹhin ami ifihan fluorescence ti micro-droplet kọọkan jẹ kika nipasẹ oluka bulọọgi-droplet kan.Išišẹ naa jẹ idiju diẹ sii, ati ewu ti idoti jẹ alabọde.
Xinyi TD1 bulọọgi-droplet oni PCRXinyi TD1 jẹ ipilẹ PCR oni nọmba inu ile, ilana wiwa ipilẹ: ṣe ina 30,000-50,000 omi-in-epo droplets nipasẹ monomono droplet, pọ si lori ohun elo PCR ti o wọpọ, ati nikẹhin kọja Oluka droplet ka ifihan agbara fluorescent ti droplet kọọkan.Mejeeji iran droplet ati kika ni pẹpẹ yii ni a ṣe ni chirún igbẹhin pẹlu eewu kekere ti ibajẹ.
STILLA Naica bulọọgi-drolet chirún oni PCRSTILLA Naica jẹ ipilẹ PCR oni nọmba tuntun kan.Ilana wiwa ipilẹ ni: ṣafikun ojutu ifa si chirún, fi chirún sinu iran micro-droplet ati eto imudara, ati ṣe ina 30,000 micro-droplets.Tan lori ërún, ati PCR ampilifaya ti wa ni ti pari lori ërún.Lẹhinna chirún ti o pọ si ti gbe lọ si eto itupalẹ kika micro-droplet, ati ifihan agbara Fuluorisenti ti ka nipasẹ yiya awọn aworan.Niwọn igba ti gbogbo ilana ti waye ni ërún pipade, eewu ti ibajẹ jẹ kekere.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D ërún oni PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D jẹ iru ẹrọ PCR oni-nọmba ti o da lori chirún Ayebaye miiran.Ilana wiwa ipilẹ rẹ ni: ṣafikun ojutu idahun sinu olutan kaakiri, ki o tan ojutu ifasẹmu boṣeyẹ lori ërún pẹlu awọn microwells 20,000 nipasẹ olutan kaakiri., fi awọn ërún lori PCR ẹrọ lati amplify, ati nipari fi awọn ërún sinu RSS ati ki o ya a Fọto lati ka Fuluorisenti ifihan agbara.Awọn isẹ ti jẹ jo idiju, ati gbogbo ilana ti wa ni ti gbe jade ni kan titi ërún, ati awọn ewu ti koto ni kekere.
5. JN MEDSYS Clarity ërún oni PCR
JN MEDSYS wípé ni a jo titun ni ërún-Iru oni PCR Syeed.Ilana wiwa ipilẹ rẹ ni: ṣafikun ojutu ifa sinu ohun elo, ki o tan ojutu idahun ni deede lori awọn ọpọn PCR 10,000 ti o wa titi ninu tube PCR nipasẹ ohun elo.Lori chirún microporous, ojutu ifaseyin ti wọ inu chirún nipasẹ igbese capillary, ati tube PCR pẹlu chirún ti gbe sori ẹrọ PCR fun imudara, ati nikẹhin a fi chirún naa sinu oluka lati ka ifihan agbara Fuluorisenti nipa gbigbe fọto kan.Awọn isẹ ti jẹ diẹ idiju.Ewu ti idoti jẹ kekere.
Awọn paramita ti iru ẹrọ PCR oni-nọmba kọọkan jẹ akopọ bi atẹle:
Awọn afihan igbelewọn ti Syeed PCR oni-nọmba jẹ: nọmba ti awọn ipin pipin, nọmba awọn ikanni fluorescent, idiju ti iṣẹ ati eewu ti ibajẹ.Ṣugbọn ohun pataki julọ ni wiwa wiwa.Ọna kan lati ṣe iṣiro awọn iru ẹrọ PCR oni-nọmba ni lati lo awọn iru ẹrọ PCR oni-nọmba pupọ lati rii daju ara wọn, ati pe ọna miiran ni lati lo awọn nkan boṣewa pẹlu awọn iye deede.
Awọn anfani ti dPCR
1.Aṣeyọri pipo pipe
2.Ti o ga ifamọ ati ni pato
3.Le ri kekere daakọ awọn ayẹwo
Awọn alailanfani ti dPCR1. Gbowolori ẹrọ ati awọn reagents 2. Idiju isẹ ati ki o gun erin akoko 3. dín erin ibiti o
Ni bayi, awọn iran mẹta ti imọ-ẹrọ PCR ni awọn anfani ati alailanfani tiwọn, ati pe ọkọọkan ni awọn aaye ohun elo tirẹ, ati pe kii ṣe ibatan ti iran kan rọpo ekeji.Ilọsiwaju ilọsiwaju ti imọ-ẹrọ ti itasi agbara tuntun sinu imọ-ẹrọ PCR, ti o muu ṣiṣẹ lati ṣii itọsọna ohun elo kan lẹhin omiiran, ṣiṣe wiwa nucleic acid ni irọrun ati deede.
Orisun: Dokita Yuan gba ọ fun idanwo
Awọn ọja ti a ṣe iṣeduro:
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-18-2022
