• facebook
  • ti sopọ mọ
  • youtube

Ẹrọ PCR|Ṣe o ye ọ gaan?

Imọ-ẹrọ PCR ti o gba Ebun Nobel

Ni ọdun 1993, Mulis onimo ijinlẹ sayensi Amẹrika gba Ebun Nobel ninu Kemistri, ati pe aṣeyọri rẹ ni ẹda ti imọ-ẹrọ PCR.Idan ti imọ-ẹrọ PCR wa ninu awọn abuda wọnyi: Ni akọkọ, iye DNA ti o yẹ ki o pọ si kere pupọ, ati ni imọ-jinlẹ ọkan moleku le ṣee lo fun imudara;keji, awọn amúṣantóbi ti ṣiṣe ni ga, ati awọn iye ti awọn afojusun jeje ni exponential.Imudara, diẹ sii ju awọn akoko miliọnu 10 ni awọn wakati diẹ.Bayi ohun elo PCR ti ni lilo pupọ ni iwadii imọ-jinlẹ igbesi aye ati ọpọlọpọ awọn aaye miiran.

Awọn awoṣe oriṣiriṣi ati awọn aṣelọpọ ti awọn olutọpa igbona le ṣafihan iṣẹ ṣiṣe oriṣiriṣi ati atunwi.Awọn iyatọ wọnyi kii ṣe iṣẹ ṣiṣe PCR nikan ṣugbọn deede ati aitasera ti data ti o gba.Agbọye awọn ẹya ẹrọ PCR le ṣe iranlọwọ fun wa lati mu aṣeyọri awọn idanwo wa pọ si.

alapapo module

Awọn išedede ti awọn iwọn otutu ti awọn gbona cycler le jẹ decisive fun awọn aseyori tabi ikuna ti PCR.Aitasera otutu-si-daradara daradara lori bulọọki alapapo tun ṣe pataki lati gba igbẹkẹle ati awọn abajade PCR ti o ṣee ṣe.

Ọna kan lati rii daju pe deede igbona ni lati ṣe idanwo nigbagbogbo nipa lilo awọn ohun elo ijẹrisi iwọn otutu ati tun ṣe atunṣe bi o ṣe nilo nipasẹ alamọdaju ti oṣiṣẹ.Awọn idanwo idanwo iwọn otutu ni igbagbogbo lo lati:

Iṣe deede-daradara ni ibatan si ṣeto iwọn otutu ni ipo isothermal

Iduroṣinṣin daradara-si-daradara ni ibatan si ṣeto iwọn otutu lẹhin iyipada iwọn otutu

Ooru ideri otutu Yiye

oye1

Alakoko Annealing otutu Iṣakoso

Išakoso iwọn otutu Gradient jẹ iṣẹ ti ohun elo PCR ti o jẹ ki iṣapeye ti imudara alakoko ni PCR.Idi ti eto gradient ni lati ṣaṣeyọri awọn iwọn otutu ti o yatọ laarin awọn modulu, ati nipasẹ ≥2°C iwọn otutu dide ati isubu laarin iwe kọọkan, awọn iwọn otutu oriṣiriṣi le ṣe idanwo ni nigbakannaa lati gba iwọn otutu annealing alakoko to dara julọ.Ni imọ-jinlẹ, gradient otitọ kan ṣe aṣeyọri iwọn otutu laini laarin awọn modulu.

Bibẹẹkọ, awọn kẹkẹ igbona igbona ti aṣa ni igbagbogbo lo bulọọki igbona kan ati iwọn otutu iṣakoso nipasẹ alapapo meji ati awọn eroja itutu agbaiye ti o wa ni opin mejeeji, nigbagbogbo nfa awọn idiwọn wọnyi:

Awọn iwọn otutu meji nikan ni a le ṣeto: awọn iwọn otutu giga ati kekere fun annealing alakoko ti ṣeto ni awọn opin mejeeji ti module gbona, ati pe eto kongẹ ti awọn iwọn otutu miiran ko ṣee ṣe laarin modul.

Nitori iyipada ooru laarin awọn oriṣiriṣi awọn ọwọn, iwọn otutu laarin awọn oriṣiriṣi awọn agbegbe lori module jẹ diẹ sii lati tẹle ọna-ọna sigmoidal dipo itọsi laini otitọ.

oye2

Ayẹwo iwọn otutu

Agbara ti cycler gbona lati ṣakoso iwọn otutu ayẹwo jẹ pataki pupọ fun deede ti awọn abajade PCR.Awọn paramita-ẹrọ kan pato gẹgẹbi awọn oṣuwọn rampu, awọn akoko idaduro, ati awọn algoridimu ṣe pataki fun asọtẹlẹ iwọn otutu ayẹwo.

Iwọn alapapo ati itutu agbaiye ẹrọ PCR tumọ si pe iwọn otutu yipada laarin awọn igbesẹ PCR ti o waye ni akoko kan.Niwọn igba ti o gba akoko kan fun ooru lati gbe lati inu module si apẹẹrẹ, alapapo gangan ati itutu agbaiye ti apẹẹrẹ yoo lọra.Nitorinaa, asọye ti iyara iyipada iwọn otutu nilo lati ṣe iyatọ ati oye.

Iwọn rampu module ti o pọju tabi tente oke duro fun iyipada iwọn otutu ti o yara ju ti module naa le ṣaṣeyọri lori akoko kekere pupọ lakoko rampu naa.

Iwọn rampu bulọọki apapọ duro fun iwọn iyipada iwọn otutu fun igba pipẹ ati pe yoo pese iwọn aṣoju diẹ sii ti iyara ẹrọ PCR.

Iwọn alapapo ti o pọju ati itutu agbaiye ati iwọn alapapo apapọ ati iwọn itutu agbaiye ṣe afihan iwọn otutu gangan ti a gba nipasẹ apẹẹrẹ.Iwọn alapapo ayẹwo ati itutu agbaiye yoo pese lafiwe deede diẹ sii ti iṣẹ ṣiṣe ti ẹrọ PCR ati ipa agbara rẹ lori awọn abajade PCR.

Nigbati o ba n ṣe rirọpo cycler, o gba ọ niyanju lati lo ohun elo kan pẹlu eto oṣuwọn rampu kan ti o ṣe simulates ipo iṣaaju fun rirọpo rọrun ati ipa kekere lori atunṣe PCR.

oye3

Olutọju cycler yẹ ki o ṣe apẹrẹ si awọn igbesẹ akoko nikan lẹhin ayẹwo ba de iwọn otutu ti a ṣeto.Ni ọna yii, akoko ti ayẹwo ti wa ni itọju ni iwọn otutu ti a ṣeto yoo wa ni deede diẹ sii ni deede pẹlu awọn ipo iwọn ti o baamu ti o nilo ninu ilana ṣiṣe.

Awọn kẹkẹ igbona nigbagbogbo lo awọn algoridimu mathematiki eka lati rii daju pe awọn ayẹwo le yara de iwọn otutu ti a ṣeto ni ibamu si eto tito tẹlẹ.Da lori iwọn ti eto ifaseyin ati sisanra ti awọn pilasitik PCR ti a lo, algorithm le ṣe asọtẹlẹ iwọn otutu ti ayẹwo ati akoko ti yoo gba lati de iwọn otutu ti a ṣeto.Gbẹkẹle awọn algoridimu wọnyi, lakoko alapapo tabi ilana itutu agbaiye ti cycler gbona, iwọn otutu bulọọki yoo ma kọja iye ti a ṣeto nipasẹ ilana ti a pe ni bulọọki igbona overshoot tabi abẹlẹ.Iru iṣeto ni idaniloju pe ayẹwo de iwọn otutu ti a ṣeto ni yarayara bi o ti ṣee laisi overshooting tabi labẹ iyaworan funrararẹ.

Esiperimenta losi

Awọn ifosiwewe ti o le ṣe alekun iṣelọpọ ti cycler gbona pẹlu awọn oṣuwọn rampu, awọn atunto bulọọki igbona, ati iṣọpọ awọn iru ẹrọ adaṣe.

Iwọn alapapo ati itutu agbaiye ti cycler gbona duro fun iyara ni eyiti o de iwọn otutu ti a ṣeto.Iyara iwọn otutu dide ati isubu, iyara PCR yoo ṣiṣẹ, eyiti o tumọ si pe awọn idanwo diẹ sii le pari ni akoko ti a fun.Ni afikun, awọn adanwo le jẹ iyara nipasẹ lilo awọn polymerases DNA yiyara.

oye4

Apẹrẹ ti module cycler gbona tun jẹ pataki fun awọn adanwo PCR.Fun apẹẹrẹ, awọn modulu rirọpo gba irọrun ni nọmba awọn ayẹwo fun ṣiṣe.Ni afikun, awọn modulu alapapo pẹlu awọn modulu iṣakoso ọkọọkan jẹ apẹrẹ fun ṣiṣe awọn eto PCR oriṣiriṣi nigbakanna lori cycler gbona kan.

oye5

Fun PCR adaṣe giga adaṣe, sọfitiwia ti o ṣakoso eto mimu pipetting yẹ ki o jẹ eto ati ibaramu.Awọn ọna ṣiṣe adaṣe jẹ apẹrẹ fun ṣiṣe awọn aati PCR giga-giga nitori wọn le ṣiṣẹ nigbagbogbo pẹlu idasi eniyan kekere, nitorinaa idinku akoko ti o nilo fun iṣeto adaṣe adaṣe ati jijẹ nọmba awọn aati ni akoko akoko ti a fun.

Igbẹkẹle, Itọju ati Imudaniloju Didara ti Awọn Cyclers Gbona

Ni afikun si iṣẹ ṣiṣe ati awọn agbara iṣelọpọ, ẹrọ PCR yẹ ki o tun ni anfani lati koju lilo kan leralera, aapọn ayika, ati awọn ipo gbigbe.Diẹ ninu awọn aṣelọpọ le ṣe ijabọ lori bii ohun elo ṣe n ṣe igbẹkẹle ati awọn idanwo agbara.Wiwa ohun elo PCR ti o baamu pẹlu:

Igbẹkẹle: Awọn ohun elo ẹrọ ẹrọ ni a lo lati ṣe awọn idanwo leralera lori awọn paati ohun elo ti a lo nigbagbogbo gẹgẹbi awọn ideri igbona, awọn panẹli iṣakoso / awọn iboju ifọwọkan, ati awọn modulu gigun kẹkẹ iwọn otutu.

Titẹ ibaramu: Awọn iyẹwu ayika le ṣee lo lati ṣe adaṣe awọn ipo oriṣiriṣi ti awọn adanwo igbagbogbo, gẹgẹbi iwọn otutu, ọriniinitutu.

Idanwo Gbigbe: Iyalẹnu nla ati idanwo gbigbọn le ṣee ṣe ni ibamu si awọn iṣedede Ẹgbẹ Aabo Aabo Kariaye lati rii daju pe ohun elo le de ni awọn ipo iṣẹ ti ko bajẹ.

oye 6

Atilẹyin ọja ati iṣẹ fun mimu PCR ẹrọ

Laibikita igbẹkẹle lile ati idanwo agbara, awọn kẹkẹ igbona laiseaniani ni awọn ọran imọ-ẹrọ lori igbesi aye ohun elo naa.Fun ifọkanbalẹ, atilẹyin ọja ti olupese, iṣẹ, ati itọju yẹ ki o gbero nigbati o n ra ohun elo kan.

Irọrun ti awọn iṣẹ bii lori aaye / ipadabọ-si-itọju ile-iṣẹ, awọn iṣẹ ibojuwo latọna jijin, ati awọn ohun elo rirọpo ninu ilana itọju, ati bẹbẹ lọ, lati dinku ipa lori iṣẹ ṣiṣe.

Gigun akoko atilẹyin ọja, akoko iyipada ti iṣẹ naa, iraye si atilẹyin imọ-ẹrọ, ati awọn ọgbọn ti oṣiṣẹ atilẹyin alamọdaju.

Iṣeṣe ti fifi sori ẹrọ ohun elo, iṣiṣẹ, ifowosowopo, ati ijẹrisi lati pade yàrá ati awọn ibeere ilana ti o jọmọ.Awọn iṣẹ itọju bii ijẹrisi iwọn otutu, idanwo, ati isọdiwọn wa lati rii daju pe ohun elo naa ṣiṣẹ daradara pẹlu awọn aye ti o baamu.

Awọn ọja ti o jọmọ:

oye7oye8


Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹwa-18-2022