• facebook
  • ti sopọ mọ
  • youtube

Awọn italologo fun Imudara Imularada Glue

1. Mu awọn ayẹwo fifuye nigba electrophoresis.

2. Lo saarin electrophoresis tuntun ti a pese silẹ.

3. Nigbati gige lẹ pọ, gbiyanju lati ge nikan lẹ pọ pẹlu awọn ila lati dinku iwọn didun ti gige lẹ pọ: ko nilo lẹ pọ pẹlu awọn ajẹkù idi diẹ, bibẹẹkọ o yoo ni ipa lori oṣuwọn imularada.

4. Lẹhin yo meji tabi diẹ ẹ sii awọn ege lẹ pọ, lo tube kan laibikita bi iwọn didun ti tobi to ki o si gbe lọ si iwe kanna.

5. Ojutu ti a fi kun ni sol le jẹ diẹ diẹ sii, eyiti o jẹ itara diẹ sii si isopọ DNA si awọ-ara, ṣugbọn ni gbogbogbo ko kọja 750ul.

6. Bọtini si imularada gel ni lati di DNA si ọwọn nipasẹ ifọkansi iyọ, acidity (idiyele) ati hydrophobicity ti ojutu ninu iwe.Nitoribẹẹ, ti pH ti ififin electrophoresis ba ga ju, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) le ṣe afikun si sol;Lati le dara si awọn ohun elo DNA ti o dara julọ lori awọ ara ilu, 30% isopropanol le ṣe afikun si ooru sinu omi lẹhin titu lẹ pọ.

7. Ṣaaju ki o to fi eluent kun, lọ kuro ni ọwọn ni iwọn otutu fun iṣẹju diẹ (nipa iṣẹju 10) lati yọ ethanol ni kikun.

8. Níkẹyìn, fi kere eluent lati gbe awọn imularada iwọn didun.Ni gbogbogbo, 30-50μl eluent ni a lo fun elution (kii ṣe diẹ, bibẹẹkọ kii yoo ni anfani lati tutu awọ-ara, eyiti ko ni itara si elution);awọn droplets elution wa ni aarin ti awo-ara, lati ni kikun yọ DNA ti a dè si awọ-ara.

9. Lẹhin fifi eluent kun, o le jẹ eluted ni iwẹ omi ti awọn iwọn 55 fun awọn iṣẹju 5 tabi gbe sinu iwẹ omi ti iwọn 50 fun diẹ ẹ sii ju iṣẹju mẹwa 10, tabi ti a fi pa pẹlu parafilm ni awọn iwọn 4 ni alẹ, ati lẹhinna centrifuged fun imularada ni ọjọ keji, ipa naa dara.

10.Fi centrifuged eluate pada si iwe adsorption ati centrifuge lẹẹkansi.

aworan8

Awọn ọna alaye ati awọn ilana fun imularada ọja PCR

1. Atunlo roba deede

Ti o ba fẹ gba awọn lẹ pọ pada, o dara julọ lati lo ohun elo kan, eyiti o rọrun ati pe o ni oṣuwọn imularada ti o ga diẹ.Ti o ba nilo gaan lati gba pada pẹlu ọwọ, o le ṣafikun awọn akoko 3 iwọn didun TE lẹhin gige lẹ pọ.Lẹhin yo ninu omi iwẹ, phenol, phenol/chloroform ti wa ni jade ni mimọ, ati ethanol ti wa ni precipitated.O n niyen.

2. DNA gbigba lati kekere yo ojuami gels

Isọdinumọ ti DNA Fragments Fi TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) dọgba si iwọn didun gel, ati gbe sinu iwẹ omi 65 ° C fun iṣẹju 5 lati tu jeli naa patapata.

Lẹhin ti o ti mu wa si iwọn otutu yara, iye dogba ti phenol (ti o kun pẹlu TE, TE ti wa ni edidi ni ipele oke, ati pe a ti yọ Layer isalẹ ti phenol kuro) ti a fi kun, ati pe a ti dapọ adalu naa rọra (ko si idapọ ti o nilo), ati centrifuged ni 12,000 rpm fun awọn iṣẹju 3.Tun 1-2 igba.

Mu supernatant naa, ṣafikun iwọn didun 0.1 ti 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) ati awọn akoko 2.5 iwọn didun ethanol pipe lati ṣe ojoriro ethanol.Tu DNA ti a sọ di mimọ pẹlu iye TE ti o yẹ, wọn akoonu, ki o mura silẹ fun lilo (o le ṣee lo fun itupalẹ ipilẹ apilẹṣẹ ibi-afẹde, igbaradi iwadii, ati bẹbẹ lọ).

3. PCR imularada pẹlu ti o dara ampilifaya pato

Ti o ba ti ni pato ti PCR ampilifaya jẹ ti o dara, o jẹ o kan kan awọn ìwẹnumọ ati gbigba ti awọn PCR ọja.O le ṣafikun 50ug/ml proteinase K si ọja PCR, awọn iwọn 37 fun 1h, jade ni ẹẹkan pẹlu phenol/chloroform, yọ jade lẹẹkan pẹlu chloroform, ati ṣafikun iwọn didun 0.1 ti supernatant.Sodium acetate ni a gba pada nipasẹ ojoriro pẹlu awọn iwọn 2.5 ti ethanol pipe.

Awọn ọja ti o jọmọ:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/


Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹsan-24-2022