Ijẹrisi iṣẹ ti awọn alakoko ati awọn iwadii ni ipele ibẹrẹ ti awọn reagents PCR ati ipinnu awọn ipo ifasẹyin ti o dara julọ jẹ awọn ohun pataki lati rii daju ilọsiwaju didan ti awọn adanwo deede.
Nitorinaa bawo ni a ṣe nilo lati jẹrisi iwadii alakoko ni ipele ibẹrẹ?
Awọn itọka akọkọ jẹ ipilẹ-ipilẹ, igbi imudara, iye ct, ṣiṣe imudara, iṣawari ayẹwo ifọkansi kekere, CV, ati bẹbẹ lọ.
Ipilẹṣẹ
Ipilẹṣẹ jẹ laini petele ni ọna imudara PCR.Ni awọn akoko diẹ akọkọ ti iṣesi imudara PCR, ifihan agbara fluorescence ko yipada pupọ ati awọn fọọmu laini taara.Laini taara yii jẹ ipilẹ.
Nigbati o ba n ṣayẹwo awọn iwadii alakoko PCR, ṣe akiyesi boya ipilẹ jẹ ipele.Iwa mimọ ti ifọkansi iwadii alakoko yoo ni ipa lori ipilẹ, bii jijẹ ipilẹ lati dide tabi ṣubu.Ipilẹṣẹ tun jẹ itọkasi ogbon inu pupọ.
Ampilifaya ti tẹ
Atọka ogbon inu miiran jẹ apẹrẹ ti ohun ti tẹ imudara.O dara julọ lati ni ọna ti o ni apẹrẹ S lati yago fun iṣamulo keji tabi awọn iha ampilifaya ajeji miiran.
Ct Iye
Nọmba awọn iyipo ti o baamu si aaye inflection lati ipilẹ-ipilẹ si idagba alapin jẹ iye Ct.
Fun apẹẹrẹ kanna, awọn iwadii alakoko ti o yatọ ja si ni oriṣiriṣi awọn igun imudara, ati pe iye Ct ti o baamu yoo ni ipa nipasẹ ṣiṣe imudara ati iwọn kikọlu.Ni imọran, iye Ct ti o kere ju ti iwadii alakoko ti a yan, dara julọ.
Imudara Imudara
Ọkan ninu awọn ọna igbẹkẹle ati iduroṣinṣin julọ fun ṣiṣe iṣiro ṣiṣe imudara PCR jẹ ohun ti tẹ boṣewa, eyiti o tun jẹ idanimọ pupọ nipasẹ awọn oniwadi.Ọna naa pẹlu ṣiṣe lẹsẹsẹ awọn ayẹwo lati ṣakoso nọmba ibatan ti awọn awoṣe ibi-afẹde.Awọn ayẹwo wọnyi ni a maa n ṣe nipasẹ awọn itọka ni tẹlentẹle ti awọn ojutu ọja ifọkansi, eyiti a lo julọ julọ jẹ dilution 10-agbo.Lilo lẹsẹsẹ awọn ayẹwo ti fomi, ni lilo eto qPCR boṣewa lati pọ si lati gba iye Cq, ati nikẹhin fa ọna kika boṣewa ni ibamu si ifọkansi ti ayẹwo kọọkan ati iye Cq ti o baamu lati gba idogba laini Cq = -klgX0 + b, ati imudara imudara E = 10 (-1 / k) -1.Nigbati o ba nlo qPCR fun itupalẹ pipo, ṣiṣe imudara ni a nilo lati wa ni iwọn 90% -110% (3.6>k>3.1).
Iwaridii Awọn ayẹwo ifọkansi-kekere
Nigbati ifọkansi ayẹwo ba kere, awọn oṣuwọn wiwa ti awọn iwadii alakoko oriṣiriṣi yatọ.A yan awọn ayẹwo ifọkansi kekere 20 lati tun ṣe, ati eto-iwadii alakoko pẹlu oṣuwọn wiwa ti o ga julọ dara julọ.
Iṣatunṣe ti Iyatọ (CV)
Awọn ayẹwo ẹda 10 le ṣee wa-ri pẹlu oriṣiriṣi awọn iwadii alakoko ni ibamu si boṣewa laini ti reagent fun iṣawari imudara acid nucleic.
Awọn Reagents Pipo:
Yiye
Awọn išedede laarin ipele kan yẹ ki o pade: olùsọdipúpọ ti iyatọ (CV,%) ti iye logarithmic ti ifọkansi idanwo jẹ ≤5%.Nigbati ifọkansi ayẹwo ba lọ silẹ, iyeida ti iyatọ (CV,%) ti logarithm ti ifọkansi wiwa jẹ ≤10%
Awọn isọdọtun agbara:
Yiye
Awọn išedede laarin ipele kan yẹ ki o pade:
(1) Iṣatunṣe ti iyatọ ti iye Ct (CV,%) ≤5%
Ayẹwo kanna ni idanwo ni afiwe fun awọn akoko 10, ati pe awọn abajade idanwo yẹ ki o wa ni ibamu
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹsan-18-2021
