Mo gbagbọ pe gbogbo eniyan yoo pade iru tabi iru awọn iṣoro nigbagbogbo nigbati o ba ṣe awọn aati PCR, ṣugbọn pupọ julọ wọn le pin si awọn iṣoro akọkọ meji:

Imudara pupọ diẹ ti awoṣe pupọ (afikun);
Pupọ pupọ ti kii ṣe ibi-afẹde pupọ.
Lilo awọn afikun jẹ ọkan ninu awọn ilana ti o wọpọ lati yanju awọn iṣoro wọnyi.Nigbagbogbo ipa ti awọn afikun ni awọn aaye meji:
secondary beti awọn Jiini (igbekalẹ keji);
Din ti kii-kan pato priming.
Loni, olootu yoo ṣafihan fun ọ ni ṣoki awọn afikun ti o wọpọ ni awọn aati PCR ati awọn iṣẹ wọn.
Awọn afikun ti o dinku eto-atẹle
sulfoxide(DMSO)
awọn ayẹwo Jiinipẹlu akoonu GC giga.Sibẹsibẹ, DMSO tun dinku iṣẹ ṣiṣe Taq polymerase pupọ.Nitorinaa, gbogbo eniyan ni lati dọgbadọgba iraye si awoṣe ati iṣẹ ṣiṣe ti polymerase.Olootu ni imọran pe o le gbiyanju awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti DSMO, gẹgẹbi lati 2% si 10%, lati wa ifọkansi ti o baamu idanwo rẹ.
Non-ionic detergents
Awọn ifọṣọ ti kii ṣe ionic, gẹgẹbi 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 tabi NP-40, nigbagbogbo dinku igbekalẹ keji DNA.Botilẹjẹpe eyi le ṣe alekun imudara ti jiini awoṣe, yoo tun fa wahala ti imudara ti kii ṣe pato.Nitorinaa, awọn afikun wọnyi ṣiṣẹ daradara fun awọn aati PCR ikore kekere laisi idoti, ṣugbọn kii ṣe daradara fun awọn aati PRC alaimọ.Anfaani miiran ti awọn ifọṣọ ti kii-ionic ni idinku ti koti SDS.Nigbagbogbo lakoko ilana isediwon DNA, SDS yoo mu wa si igbesẹ PCR, eyiti o ṣe idiwọ iṣẹ ṣiṣe ti polymerase pupọ.Nitorinaa, fifi 0.5% Tween-20 tabi Tween-40 si iṣesi le yomi awọn ipa odi ti SDS.
Betaine_
Betaine le mu imudara DNA pọ si nipa idinku idasile igbekalẹ keji ati pe gbogbogbo “ohun ijinlẹ” ni afikun si awọn ohun elo PCR ti iṣowo.Ti o ba fẹ lo betaine, o yẹ ki o fi betaine tabi betaine mono-hydrate (Betaine tabi Betaine mono-hydrate), ṣugbọn kii ṣe betaine hydrochloride (Betaine HCl), ṣatunṣe si ifọkansi ikẹhin ti 1-1.7M.Betaine tun le ṣe iranlọwọ imudara ni pato nitori pe o yọkuro igbẹkẹle akojọpọ akojọpọ ipilẹ ti DNA yo/ denaturation DNA.
Awọn afikun lati dinku priming ti kii ṣe pato
Formamide
Formamide jẹ aropọ PCR Organic ti o wọpọ julọ.O le darapọ pẹlu iho nla ati yara kekere ni DNA, nitorinaa idinku iduroṣinṣin ti ọga DNA helix meji ati sisọnu iwọn otutu yo ti DNA.Ifojusi ti formamide ti a lo ninu awọn idanwo PCR nigbagbogbo jẹ 1% -5%.
Tetramethylammonium kiloraidi( TMAC)
Tetramethylammonium kiloraidi le ṣe alekun iyasọtọ ti arabara (itumọ ti arabara) ati mu iwọn otutu yo ti DNA pọ si.Nitorinaa, TMAC le yọkuro alakoko ti kii ṣe pato ati dinku aiṣedeede DNA ati RNA.Ti o ba loawọn alakoko ti o bajẹninu iṣesi PCR, ranti lati ṣafikun TMAC, eyiti a lo nigbagbogbo ni ifọkansi ti 15-100mM.
Miiran wọpọ Additives
Ni afikun si awọn ẹka meji ti awọn afikun ti a mẹnuba loke, ọpọlọpọ awọn afikun ti o wọpọ ni awọn aati PCR, botilẹjẹpe wọn ni awọn iṣẹ oriṣiriṣi, wọn tun ṣe pataki pupọ.
Iṣuu magnẹsia
Ion magnẹsia jẹ cofactor ti ko ṣe pataki (cofactor) ti polymerase, iyẹn ni pe, laisi ion magnẹsia, polymerase ko ṣiṣẹ.Sibẹsibẹ, awọn ions iṣuu magnẹsia pupọ tun le ni ipa lori ṣiṣe ti polymerase.Ifojusi ti awọn ions iṣuu magnẹsia ni iṣesi PCR kọọkan yoo yatọ.Awọn aṣoju chelating (gẹgẹbi EDTA tabi citrate), ifọkansi ti dNTPs ati awọn ọlọjẹ gbogbo ni ipa lori ifọkansi ti awọn ions magnẹsia.Nitorinaa, ti o ba ni awọn iṣoro pẹlu idanwo PCR rẹ, o le gbiyanju lati yi awọn ifọkansi ion iṣuu magnẹsia oriṣiriṣi pada, fun apẹẹrẹ, lati 1.0 si 4.0mM, pẹlu aarin 0.5-1mM laarin.
O tọ lati ṣe akiyesi pe ọpọlọpọ awọn iyipo didi-diẹ le ja si isọdi ifọkansi ti ojutu kiloraidi iṣuu magnẹsia.Nitorinaa, o gbọdọ tu patapata ṣaaju lilo kọọkan, ki o dapọ daradara ṣaaju lilo rẹ.
omi ara eran albumin(Bovine albumin, BSA)
Ninu awọn adanwo kemistri molikula, omi ara bovine albumin jẹ aropọ ti o wọpọ pupọ, ni pataki ni tito nkan lẹsẹsẹ enzyme ihamọ ati awọn adanwo PCR.Ninu awọn aati PCR, BSA ṣe iranlọwọ ni idinku awọn contaminants bii awọn agbo ogun phenolic.Ati pe o tun sọ pe o le dinku ifaramọ ti awọn reactants si ogiri tube idanwo naa.Ninu iṣesi PCR, igbagbogbo ifọkansi ti BSA ti a ṣafikun le de 0.8 mg/milimita.
 
Awọn ọja ti o jọmọ:
PCR akoni(pẹlu awọ)
PCR akoni