Iye Ct jẹ fọọmu igbejade abajade pataki julọ ti PCR pipo fluorescent.O jẹ lilo lati ṣe iṣiro awọn iyatọ ikosile pupọ tabi nọmba ẹda ẹda.Nitorinaa kini iye Ct ti iwọn fluorescence ti a ro pe o jẹ oye?Bii o ṣe le rii daju ibiti o munadoko ti iye Ct?

Kini iye Ct?
Lakoko ilana imudara qPCR, nọmba ti o baamu ti awọn iyika ampilifaya (Ilana Yiyi) nigbati ami ifihan fluorescence ti ọja imudara ba de opin ilẹ fluorescence ti a ṣeto.C dúró fun Cycle ati T dúró fun Ipele.Ni irọrun, iye Ct jẹ nọmba awọn iyipo ti o baamu nigbati imudara awoṣe akọkọ ba de iye ọja kan ni qPCR.Ohun ti a pe ni “iye ọja kan” yoo ṣe alaye siwaju sii nigbamii.

Kini iye Ct ṣe?

1.Relationship laarin awọn amúṣantóbi ti exponential, awoṣe iye ati Ct iye
Bi o ṣe yẹ, awọn Jiini ni qPCR ni a kojọpọ nipasẹ imudara alapọlọpọ lẹhin nọmba awọn iyipo kan.Ibasepo laarin nọmba awọn iyika ampilifaya ati iye awọn ọja jẹ: Iye ọja ti o pọ = iye awoṣe ibẹrẹ × (1+En) nọmba awọn iyipo.Sibẹsibẹ, iṣesi qPCR kii ṣe nigbagbogbo ni ipo pipe.Nigbati iye ọja ti o pọ si de “iye ọja kan”, nọmba awọn iyipo ni akoko yii ni iye Ct, ati pe o wa ni akoko imudara iwọn.Ibasepo laarin iye Ct ati iye awoṣe ibẹrẹ: Ibasepo laini wa laarin iye Ct ti awoṣe ati logarithm ti nọmba ẹda ti o bere ti awoṣe.Idojukọ awoṣe akọkọ ti o ga julọ, iye Ct kere si;isalẹ ifọkansi awoṣe ibẹrẹ, ti o tobi ni iye Ct.

2.Amplification curve, fluorescence ala ati iye ọja PCR kan
Iye ọja imudara qPCR ni a gbekalẹ taara ni irisi ifihan agbara Fuluorisenti, iyẹn ni, igbi imudara.Ni ipele ibẹrẹ ti PCR, ampilifaya wa labẹ awọn ipo to dara, nọmba awọn iyipo jẹ kekere, ikojọpọ ọja jẹ kekere, ati ipele ti fluorescence ko le ṣe iyatọ kedere lati ẹhin fluorescence.Lẹhin iyẹn, fluorescence pọ si ati ki o wọ inu ipele ti o pọju.Iye ọja PCR le ṣee wa-ri ni aaye kan nigbati iṣesi PCR kan wa ni ipele ipari, eyiti o le ṣee lo bi “iye ọja kan”, ati pe akoonu ibẹrẹ ti awoṣe le yọkuro lati eyi.Nitorinaa, kikankikan ifihan fluorescence ti o baamu si iye ọja kan ni iloro fluorescence.

Ni ipele ti o pẹ ti PCR, igbi imudara ko ṣe afihan imudara iwọn mọ, o si wọ inu ipele laini ati ipele Plateau.

3.Reproducibility ti awọn iye Ct
Nigbati ọmọ PCR ba de nọmba ọmọ ti iye Ct, o kan ti tẹ akoko imudara alafojusi tootọ.Ni akoko yii, aṣiṣe kekere ko ti ni ilọsiwaju, nitorina atunṣe ti iye Ct jẹ dara julọ, eyini ni, awoṣe kanna ti wa ni afikun ni awọn akoko oriṣiriṣi tabi ni awọn tubes ti o yatọ ni akoko kanna.Imudara, iye Ct ti o gba jẹ igbagbogbo.

1.Amplification ṣiṣe En
Imudara imudara PCR n tọka si ṣiṣe pẹlu eyiti polymerase ṣe iyipada jiini lati jẹ imudara sinu ampilifaya.Imudara imudara nigbati moleku DNA kan ti yipada si awọn sẹẹli DNA meji jẹ 100%.Imudara imudara jẹ afihan ni igbagbogbo bi En.Lati le dẹrọ itupalẹ awọn nkan ti o tẹle, awọn okunfa ti o ni ipa imudara imudara ni a ṣafihan ni ṣoki.

2.Range ti awọn iye Ct
Awọn iye Ct wa lati 15-35.Ti iye Ct ba kere ju 15, a gba pe amúṣantóbi ti wa laarin awọn sakani ti awọn akoko ipetele ati awọn fluorescence ala ti ko ti de.Bi o ṣe yẹ, ibatan laini wa laarin iye Ct ati logarithm ti nọmba ẹda akọkọ ti awoṣe, iyẹn ni, titẹ boṣewa.Nipasẹ awọn boṣewa ti tẹ, nigbati awọn ampilifaya ṣiṣe ni 100%, awọn iṣiro Ct iye fun a ṣe iwọn awọn nikan daakọ nọmba ti awọn pupọ ni ayika 35. Ti o ba ti o tobi ju 35, awọn ni ibẹrẹ daakọ nọmba ti awọn awoṣe jẹ oṣeeṣe kere ju 1, eyi ti o le wa ni kà asan.

Fun awọn sakani Jiini Ct ti o yatọ, nitori iyatọ ninu nọmba ẹda ẹda pupọ ati ṣiṣe imudara ni iye awoṣe ibẹrẹ, o jẹ dandan lati ṣe igbiwọn boṣewa fun pupọ ati ṣe iṣiro ibiti wiwa laini ti pupọ.

3.Awọn ifosiwewe ti o ni ipa ti iye Ct
Lati awọn ibasepọ laarin awọn nọmba ti ampilifaya iyika ati awọn iye ti ọja: iye ti ampilifaya ọja = iye ti ibẹrẹ awoṣe × (1+En) ọmọ nọmba, o le wa ni ri pe labẹ bojumu awọn ipo, iye ti ni ibẹrẹ awoṣe ati En yoo ni a odi ikolu lori Ct iye.Iyatọ ninu didara awoṣe tabi ṣiṣe imudara yoo fa ki iye Ct tobi ju tabi kere ju.

4.Ct iye jẹ ju tobi tabi ju kekere