Laipe, Mo ti ṣe awari ohun iyanu!Ọpọlọpọ awọn alamọja adanwo to ti ni ilọsiwaju ti o wa ni ayika rẹ ko mọ diẹ ninu awọn aaye imọ idanwo ipilẹ pupọ.

Fun apẹẹrẹ, ṣe o le dahun awọn ibeere wọnyi?

Ṣe iyatọ laarin OD260 ati A260?Kini ọkọọkan tumọ si?
OD jẹ abbreviation ti iwuwo opitika (iwuwo opiti), A jẹ abbreviation ti absorbance (absorbance), awọn imọran meji jẹ gangan kanna, “iwuwo opiti” jẹ “absorbance”, ṣugbọn “iwuwo opiti” wa ni ibamu pẹlu ọpọlọpọ awọn ipele ti orilẹ-ede ati diẹ sii.

Nigbagbogbo a wọn iye OD ni 260nm lati ṣe iṣiro ifọkansi acid nucleic, nitorinaa kini 1OD ṣe aṣoju?
Nucleic acid ni tente gbigba gbigba ti o pọju ni igbi ti 260nm, eyiti o ni DNA ati RNA mejeeji ninu, bakanna bi awọn ajẹkù acid nucleic ti a pin (eyi ni aaye pataki).
Iye OD ti a wọn ni gigun ti 260 nm ni a gbasilẹ bi OD260.Ti ayẹwo ba jẹ mimọ, iye OD260 le ṣe iṣiro ifọkansi ti ayẹwo acid nucleic.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA ti o ni okun meji)
= 37 μg/ml ssDNA (DNA ti o ni okun kan)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
Ṣe eyikeyi asopọ ati iyato laarin RT-PCR, Realtime-PCR ati QPCR?
RT-PCR jẹ kukuru fun PCR Transcription Yiyipada
Real Time PCR = qPCR, kukuru fun pipo Real Time PCR
Bó tilẹ jẹ pé Real Time PCR (gidi-akoko fluorescent pipo PCR) ati Yiyipada transcription PCR (yiyipada PCR transcription) mejeeji dabi lati wa ni abbreviated bi RT-PCR.Ṣugbọn apejọ kariaye jẹ: RT-PCR ni pataki tọka si yiyipada PCR transcription.

Kini nt, bp, ati kb ti o wọpọ lati ṣe apejuwe gigun DNA/RNA ninu isedale?
nt = nucleotide
bp = ipilẹ bata ipilẹ bata
kb = kilobase

Dajudaju, iwọ yoo sọ pe ọpọlọpọ eniyan ko bikita nipa awọn alaye kekere wọnyi!Gbogbo eniyan ni o ṣe eyi, ko si si ẹnikan ti yoo beere lọwọ rẹ kini o jẹ.O mọ pe eyi ko wulo, otun?

Rara, Bẹẹkọ, Bẹẹkọ, o jẹ dandan lati mọ eyi!nitori kini?
Nitori ti o fẹ lati fí ohun article!Arakunrin!Boya o n ṣe ifọkansi fun ayẹyẹ ipari ẹkọ tabi lepa awọn aṣeyọri iwadii imọ-jinlẹ, o gbọdọ gbarale awọn nkan lati sọrọ!

Iyọkuro acid Nucleic yẹ ki o jẹ idanwo ti o rọrun julọ ati ipilẹ julọ.Didara isediwon acid nucleic taara pinnu awọn abajade ti awọn adanwo ti o tẹle.

Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ọ̀pọ̀ ìgbà ni mo ti sọ ọ́, àwọn ọ̀rẹ́ púpọ̀ ṣì wà tí wọn ò bìkítà.Ni akoko yii Mo pinnu lati jade kuro ninu nkan naa!

Alaye ti o kere julọ fun Titẹjade ti Awọn adanwo PCR Akoko-gidi, tọka si MIQE, jẹ eto awọn itọnisọna idanwo iwọn fluorescence ti a ṣe ifilọlẹ ni kariaye, eyiti o ṣeduro awọn iṣedede ti o kere julọ fun alaye esiperimenta pataki fun iṣiroye awọn adanwo PCR iwọn fluorescence ati awọn nkan titẹjade.Nipasẹ awọn ipo adanwo ati awọn ọna itupalẹ ti a pese nipasẹ alayẹwo, awọn oluyẹwo le dara julọ ṣe iṣiro ifọwọsi ti ero idanwo oniwadi.

O le rii pe ni apakan ti isediwon acid nucleic, awọn nkan wiwa atẹle wọnyi ti ni imọran,

“E” tọkasi alaye ti o gbọdọ pese ati “D” tọkasi alaye ti o yẹ ki o pese ti o ba jẹ dandan.

Fọọmu naa jẹ idiju pupọ, ni otitọ, Mo fẹ sọ pe gbogbo eniyan nilo lati bẹrẹ lati

mimọ (D), ikore (D), iyege (E) ati aitasera (E) lati ṣe iṣiro awọn acids Nucleic ni awọn aaye mẹrin wọnyi.

Gẹgẹbi awọn iṣesi idanwo, akọkọ sọrọ nipa awọn ọna igbelewọn ti mimọ ati ifọkansi.

Iwọn OD jẹ ayanfẹ ati ọna wiwa rọrun julọ fun awọn aladanwo.Bi fun opo, Emi kii yoo lọ sinu awọn alaye nibi.Ọpọlọpọ awọn ile-iṣere ni bayi lo ultra-micro spectrophotometers lati ṣe itupalẹ iwọn taara taara awọn ayẹwo acid nucleic.Lakoko ti o nfihan iye gbigba, eto naa taara fun iye ifọkansi (acid nucleic, amuaradagba ati awọ fluorescent) ati awọn ipin ti o jọmọ.Bi fun itupalẹ iye OD, Fi aworan yii pamọ ati pe iwọ yoo dara.

Gbogbo OD iye ojutu akojọ

Sibẹsibẹ, awọn akiyesi diẹ wa ti o nilo lati mu jade lọtọ fun ọ.

(Lẹhinna, Mo mọ pe o gbọdọ jẹ awọn ti o fipamọ ati duro titi iwọ o fi nilo wọn!)

Akiyesi 1 Ohun elo

Iye OD yoo ni ipa nipasẹ awọn ohun elo oriṣiriṣi.Niwọn igba ti OD260 wa laarin iwọn kan, awọn iye ti OD230 ati OD280 ni itumọ.Fun apẹẹrẹ, ibiti gbigba ti Eppendorf D30 ti o wọpọ ni 260nm jẹ 0 ~ 3A, ati NanoDrop Ọkan ti Thermo wa ni 260nm.Iwọn gbigba ti 0.5 ~ 62.5A.

Akiyesi 2Dilution reagent

Awọn OD iye le ti wa ni fowo nipasẹ awọn fomipo ti o yatọ si reagents.Fun apẹẹrẹ, OD260/280 kika ti RNA mimọ ni pH7.5 10mM Trisifipamọ laarin 1.9-2.1, nigba ti nididoju olomi ojutuipin naa yoo dinku, boya 1.8-2.0 nikan, ṣugbọn eyi ko tumọ si pe didara RNA yipada Iyatọ.

Akiyesi 3Awọn nkan ti o ku

Aye awọn nkan ti o ku yoo ni ipa lori deede ti wiwọn ifọkansi acid nucleic, nitorinaa o jẹ dandan lati yago fun amuaradagba, phenol, polysaccharide ati awọn iṣẹku polyphenol ni awọn ayẹwo acid nucleic bi o ti ṣee ṣe.

Sibẹsibẹ, ni otitọ, isediwon pẹlu awọn reagents Organic jẹ ọna atijọ.Ninu awọn ohun elo iṣowo, ipa isediwon le ṣee ṣe nipasẹ ọwọn adsorption ti o da lori silica ni idapo pẹlu centrifugation, yago fun majele ati awọn reagents Organic ipalara ti o nira lati yọ kuro, ati bẹbẹ lọ.Ohun elo isediwon acid nucleic ti Foregene, ko lo DNase/RNase ati awọn reagents Organic majele jakejado iṣẹ naa, yiyara ati ailewu, ati awọnipa nidara(lairotẹlẹ so wipe o je pá, ṣugbọn emi mọ ti o fẹ lati mọ).

Apẹẹrẹ 1: Isojade isediwon DNA Genomic ati mimọ

Ohun elo Ipinya Ilẹ DNA Foregene (DE-05511) ṣe itọju awọn ayẹwo ile lati oriṣiriṣi awọn orisun, ati iye ati mimọ ti DNA genomic ti o gba ni afihan ni tabili atẹle:
Apẹẹrẹ 2: Isojade isediwon RNA Tissue ati mimọ

Apo Ipinya RNA lapapọ ti ẹranko (RE-03012) ṣe ilana ọpọlọpọ awọn ayẹwo ara, ati iye ati mimọ ti RNA ti o gba ni a fihan ninu tabili ni isalẹ (fun àsopọ asin):
Sibẹsibẹ, maṣe ro pe o ti ṣe pẹlu iye OD.Ṣe o ni itọju eyikeyi ti awọn aaye pataki ti Mo fa fun ọ ni iwaju?

Akiyesi

Awọn moleku acid nucleic ti a pin yoo tun ṣe iṣiro ni gbigba.A ro pe o ni awọn iṣẹku DNA jiini ninu RNA, iye OD rẹ yoo dabi pe o ga pupọ, ṣugbọn ifọkansi RNA gangan ko le pinnu.Boya RNA rẹ ko ṣe kedere boya ibajẹ wa, nitorinaa a tun nilo ọna igbelewọn okeerẹ lati funni ni idajọ deede diẹ sii, iyẹn ni, igbelewọn iduroṣinṣin acid nucleic ti mẹnuba ninu MIQE.