Awọn iwe afọwọkọ ti aṣa ko le farada awọn iwọn otutu giga (iwọn otutu ti o dara julọ fun iṣẹ MMLV jẹ 37-50°C, ati AMV jẹ 42-60°C).RNA gbogun ti eka diẹ sii ko le ṣe ifasilẹ ni imunadoko ti a kọ sinu cDNA ni awọn iwọn otutu kekere, ti o yorisi ṣiṣe wiwa Idinku.RT-qPCR ti aṣa ni gbogbogbo nilo ikopa ti awọn ensaemusi bọtini meji (iyipada transcriptase ati DNA polymerase), eyiti o jẹ ki ko ṣee ṣe lati rọrun iṣẹ ti eto ifaseyin ati dinku idiyele naa.Nibi a yoo ṣafihan awọn iwe afọwọkọ yiyipada iwọn otutu giga meji, TtH ati RevTaq.Awọn enzymu meji wọnyi tun ni iṣẹ ti DNA polymerase, nitorinaa wọn pe wọn ni awọn enzymu bifunctional.

Tth DNA polymerase

O gbọdọ ti gbọ nipa TtH, eyiti o jẹ lati inu kokoro-arun thermophilic Thermus thermophilus HB8.Ni iwaju awọn cations divalent gẹgẹbi Mg2+, o ni iṣẹ ṣiṣe DNA polymerase.O ti wa ni lilo pupọ ni awọn aati PCR bi Taq henensiamu, ṣugbọn o ni resistance ooru ti o ga ju henensiamu Taq, nitorinaa o tun ni ipa ti o dara julọ lori PCR pẹlu awọn awoṣe akoonu GC giga.

· Yi enzymu besikale ko ni 3′→5′ exonuclease aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ati 5′→3′ exonuclease aṣayan iṣẹ-ṣiṣe, ki o tun le ṣee lo fun dideoxy lesese.

· Enzymu yii ni iṣẹ ṣiṣe RTase.Ni iwaju Mn2+, iṣẹ RTase yoo ni ilọsiwaju.Lilo ẹya ara ẹrọ yi, o le ṣee lo lati ṣe ifaseyin transcription ati esi PCR ni tube kanna, iyẹn ni, RT-PCR-igbesẹ kan.Sibẹsibẹ, niwaju Mn2+, deede RT-PCR ko ga.RT aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ni o ni nkankan lati se pẹlu rnaase H aṣayan iṣẹ-ṣiṣe.

Iṣẹ ṣiṣe pọ si ti Tth-DNA polymerase (pH9, ti o dara julọ +55℃～+70℃, o pọju +95℃) bori awọn iṣoro ti o ṣẹlẹ nipasẹ igbekalẹ RNA keji.Abajade cDNA le jẹ imudara nipasẹ PCR pẹlu enzymu kanna ni iwaju awọn ions Mg2+.

· Agbara ti Tth-DNA polymerase lati ṣe iyipada iyipada ati imudara DNA ni awọn iwọn otutu ti o ga julọ jẹ ki enzymu yii wulo fun titobi RT-PCR, cloning, ati iṣiro ikosile pupọ ti cellular ati viral RNA.
Tth-DNA polymerase jẹ lilo fun RT-PCR lati mu RNA pọ si 1kb.

Awọn ẹya ara ẹrọ ati awọn anfani

polymerase DNA Tth:

Rii daju iwọn ọja polymerase pq ti iṣapeye (PCR), o kere ju 1000 bp ninu iṣesi RT-PCR

• Gba triphosphate deoxyribonucleoside ti a ṣe atunṣe bi sobusitireti

Ko ṣe ibatan si iṣẹ RNase H

• Ni iduroṣinṣin igbona giga lati bori awọn iṣoro, nigbagbogbo ni ibatan si eto ile-ẹkọ giga giga ti o wa ni RNA

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

DNA polymerase ti ko ni igbona pẹlu iṣẹ-ṣiṣe transcriptase yiyipada

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase jẹ imọ-ẹrọ, sooro igbona pupọ, enzymu iṣẹ-meji pẹlu transscriptase yiyipada ati awọn iṣẹ polymerase DNA ti a gba nipasẹ itọsọna ati itankalẹ atọwọda.

· Idaji igbesi aye RevTaq RT-PCR DNA polymerase ni 95°C tobi ju iṣẹju 40 lọ.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ngbanilaaye transcription ti o ga ni iwọn otutu taara lati inu awoṣe RNA, ati pe igbesẹ transcription le tun ṣe ni igba pupọ lati ṣe awọn awoṣe cDNA diẹ sii.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ngbanilaaye “igbesẹ-odo” RT-PCR (ko si igbesẹ transcription isothermal), nitori ni igbesẹ itẹsiwaju PCR cyclic, transcription yiyipada ati imudara DNA waye ni nigbakannaa.Eyi tun ṣe agbega ifasilẹ transcription yiyipada ni awọn iwọn otutu giga, nitorinaa idinku awọn iṣoro ti o ba pade ni yo eto ile-ẹkọ giga ti o lagbara ni RNA ni awọn iwọn otutu giga.

Nitori agbekalẹ ibẹrẹ-gbigbona ti o da lori aptamer, RevTaq RT-PCR DNA polymerase yoo ṣe awọn abajade to dara julọ nigbati imudara ati iwọn otutu itẹsiwaju ba ga ju 57°C.

· Niwọn igba ti henensiamu jẹ sooro ooru, o niyanju lati ṣe apẹrẹ awọn alakoko ati awọn iwadii pẹlu awọn aaye yo ti o ga pupọ (> 60 ° C).

· O ti wa ni niyanju lati je ki awọn iwọn otutu ti awọn annealing / itẹsiwaju igbese nipasẹ kan otutu ite nigba ti lenu oso ilana.

· Awọn ti o ga awọn iwọn otutu, awọn ti o ga ni pato ti PCR.Yiyipo transcription yii ni a maa n ṣe ni iwọn otutu ti o ga ju iwọn PCR lọ, nitori DNA Alakoko: RNA Àdàkọ arabara maa n ni aaye yo ti o ga ju DNA Alakoko: cDNA Template duplex.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase jẹ iṣẹ-ṣiṣe ti jiini ati iṣapeye, ati iwọn titobi wa laarin 60-300 bp.

Iwọn wiwa RevTaq RT-PCR DNA polymerase de awọn ẹda 4/

Eto ifasilẹ ti iṣapeye (idasile ti awọn alakoko ti o ga julọ) ti han ni nọmba.RevTaq RT-PCR DNA polymerase-iwakọ RT-PCR ṣe afihan ifamọ to dara ju TaqPath 1-igbesẹ RT-qPCR adapo ọga, ati wiwa isalẹ Ayẹwo dilution gradient.

Awọn anfani diẹ sii:

Iṣẹ ibẹrẹ ni iyara → Igbesẹ denaturation gbigbona akọkọ le jẹ fo.

Gbona-ibẹrẹ apẹrẹ aptamer → Pese iṣẹ-ṣiṣe enzymu 100% lẹsẹkẹsẹ ati ṣe idiwọ imudara ti kii ṣe pato ni awọn iwọn otutu kekere (<57°C).

Iṣẹ fifọ → Igbesẹ isediwon RNA ti yọkuro, nitori RevTaq RT-PCR DNA polymerase tun le ṣe ilana awọn ayẹwo ifaseyin robi.O le pa awọn membran sẹẹli ti eukaryotes, kokoro arun ati awọn ọlọjẹ run lẹsẹkẹsẹ ninu ọmọ RT-PCR ti o gbona.

Ipele ohun elo aise IVD → awọn iṣedede didara giga ati awọn idiyele ifigagbaga pupọ