Buccal Swab/Kaadi FTA DNA Ipinya Ohun elo Genomic DNA Extraction tabi Ohun elo Isọdi lati Buccal Swabs
Apejuwe Apo:
Ni kiakia wẹ DNA jinomiki ti o ni agbara giga lati awọn ayẹwo buccal swab/FTA Card.
◮Ko si ibajẹ RNase:Ọwọn DNA-Nikan ti a pese nipasẹ ohun elo jẹ ki o ṣee ṣe lati yọ RNA kuro ninu DNA jinomiki laisi fifi RNase kun lakoko idanwo naa, ṣe idiwọ ile-iyẹwu lati jẹ idoti nipasẹ RNase exogenous.
◮Iyara iyara:Foregene Protease ni iṣẹ ṣiṣe ti o ga ju awọn proteases ti o jọra lọ, o si n ṣe awopọ awọn ayẹwo àsopọ ni kiakia;išišẹ naa rọrun, ati iṣẹ isediwon DNA genomic le pari laarin awọn iṣẹju 20-80.
◮Rọrun:Awọn centrifugation ti wa ni ošišẹ ti ni yara otutu, ko si si nilo fun 4°C kekere-otutu centrifugation tabi ethanol ojoriro ti DNA.
◮Aabo:Ko si isediwon reagent Organic ko nilo.
◮Oniga nla:DNA genomic ti a fa jade ni awọn ajẹkù nla, ko si RNA, ko si RNase, ati akoonu ion kekere pupọju, eyiti o le pade awọn ibeere ti awọn adanwo lọpọlọpọ.
◮Eto Micro-elution:O le ṣe alekun ifọkansi ti DNA genomic, eyiti o rọrun fun wiwa isalẹ tabi idanwo.
Apejuwe
Ohun elo yii n pese ọna ti o munadoko ati iyara lati gba DNA genomic ifọkansi giga lati awọn swabs buccal ati FTA Card (awọn aaye ẹjẹ).Lilo ile-iṣẹ wa's oto DNA-nikan silica membrane spin column and formula, ni idapo pelu Foregene Protease, ifọkansi-giga, DNA genomic didara ti o ga julọ le fa jade ni iṣẹju 80.Ọwọn ìwẹnumọ kekere ti a ṣe ni pataki ṣe asopọ DNA jiini, ati pe DNA le ṣe yọkuro pẹlu iye kekere (15μl) eto elution lati mu ifọkansi ti DNA genomic ti o gba, eyiti o rọrun fun wiwa isalẹ tabi idanwo.Ohun elo naa le ṣe ilana ọkan tabi diẹ ẹ sii awọn ayẹwo ni akoko kan, ati pe ilana isọdọmọ ko nilo isediwon ti awọn nkan Organic gẹgẹbi phenol, chloroform, ati isopropanol ti n gba akoko tabi ojoriro ethanol, ati pe iṣẹ naa rọrun ati fifipamọ akoko.
Awọn pato
50 Awọn igbaradi
Awọn paati ohun elo
| Ifipamọ ST1 |
| Ifipamọ ST2 |
| Acrylamide laini |
| Buffer PW |
| Ifipamọ WB |
| Ifipamọ EB |
| Protease Foregene |
| Ọwọn DNA-Nikan |
| Awọn ilana |
Awọn ẹya & awọn anfani
-Ko si ibajẹ RNase: Apapọ DNA-Nikan ti a pese nipasẹ ohun elo naa jẹ ki o ṣee ṣe lati yọ RNA kuro ninu DNA jiini laisi fifi RNase kun lakoko idanwo naa, yago fun ile-iwosan lati jẹ ibajẹ nipasẹ RNase exogenous.
-Iyara iyara: Foregene Protease ni iṣẹ ṣiṣe ti o ga ju awọn ọlọjẹ ti o jọra lọ, awọn ayẹwo ni kiakia;o rọrun isẹ.
-Rọrun: A ṣe centrifugation ni iwọn otutu yara, ati pe ko si iwulo fun iwọn otutu kekere 4 ° C tabi ojoriro ethanol ti DNA.
-Aabo: Ko si isediwon reagent Organic ti a beere.
Didara to gaju: DNA genomic ti a fa jade ni awọn ajẹkù nla, ko si RNA, ko si RNase, ati akoonu iwọn kekere pupọ, eyiti o le pade awọn ibeere ti awọn adanwo lọpọlọpọ.
-Micro-elution System: O le mu ifọkansi ti DNA genomic pọ si, eyiti o rọrun fun wiwa isalẹ tabi idanwo.
Ohun elo Kit
O dara fun isọdi ti DNA genomic lati awọn apẹẹrẹ wọnyi: buccal swabs, FTA Card (awọn abawọn ẹjẹ).
Ibi ipamọ ati igbesi aye Selifu
-A le fi ohun elo yii pamọ fun awọn oṣu 12 labẹ awọn ipo gbigbẹ ni iwọn otutu yara (15-25 ° C);Ti o ba nilo lati wa ni ipamọ fun igba pipẹ, o le wa ni ipamọ ni 2-8 ° C.
Akiyesi: Ti o ba tọju ni iwọn otutu kekere, ojutu naa jẹ itara si ojoriro.Ṣaaju lilo, rii daju lati gbe ojutu sinu kit ni iwọn otutu yara fun akoko kan.Ti o ba jẹ dandan, ṣaju rẹ ni ibi iwẹ omi 37 ° C fun iṣẹju mẹwa 10 lati tu ito, ki o dapọ ṣaaju lilo.
-Foregene Protease ojutu ni o ni a oto agbekalẹ, eyi ti o jẹ lọwọ nigba ti o ti fipamọ ni yara otutu fun igba pipẹ (3 osu);iṣẹ ṣiṣe ati iduroṣinṣin rẹ yoo dara julọ nigbati o ba fipamọ ni 4 ° C, nitorinaa a ṣe iṣeduro lati tọju rẹ ni 4 ° C, ranti lati ma tọju rẹ ni -20 ° C.
Ọwọ̀ ìwẹ̀nùmọ́ ti dí
Ninu ohun elo yii, ninu iṣẹ isediwon DNA genomic, iwe iwẹnumọ ti wa ni taara taara lori apopọ enzymatic lysis ayẹwo laisi igbesẹ centrifugation, ati iwe mimọ le dina nitori enzymization ti ko pe ati iki giga ti apẹẹrẹ.
Awọn idi wọnyi ti o ṣeeṣe jẹ bi wọnyi:
1. Tito nkan lẹsẹsẹ enzymatic ti ko pe ti awọn ayẹwo ti ara.
Iṣeduro: Akoko ṣiṣe ayẹwo ti Foregene Protease le faagun ni deede tabi a le mu supernatant lẹhin centrifugation ni 12,000 rpm (~ 13,400 × g) fun iṣẹju 5.
2. Lilo pupọ ti awọn ayẹwo iṣan tabi awọn tisọ nla.
Iṣeduro: O dara julọ lati ma kọja 1 Buccal swab ninu apẹẹrẹ;ti ayẹwo ba tobi ju, mu iwọn lilo Buffer ST1 pọ si, Foregene Protease, buffer ST2 ni ibamu.
3. Ayẹwo iki ti ga ju.
Iṣeduro: Awọn ayẹwo le jẹ ti fomi daradara pẹlu 10 mM ti Tris-HCl ṣaaju isediwon DNA genomic.
4. A ti fa ajẹkù ti kaadi ẹjẹ.
Iṣeduro: Akoko centrifugation tionkojalo ti igbesẹ 6 ti iranran ẹjẹ (Kaadi FTA) isediwon jiini le faagun ni deede.
Ikore kekere tabi ko si DNA
Nigbagbogbo ọpọlọpọ awọn ifosiwewe ti o ni ipa lori ikore DNA genomic, pẹlu ipilẹṣẹ ayẹwo, awọn ipo ibi ipamọ ayẹwo, igbaradi ayẹwo, ifọwọyi, ati bẹbẹ lọ.
DNA genomic ko le gba lakoko isediwon
Awọn idi ti o ṣeeṣe jẹ bi wọnyi:
1. Itoju ti ko tọ ti awọn ayẹwo tabi ibi ipamọ fun igba pipẹ nyorisi ibajẹ DNA genomic.
Iṣeduro: Awọn swabs ẹnu yẹ ki o dara julọ jẹ ayẹwo tuntun, ati pe ko ni imọran lati lo awọn swabs ti a fipamọ fun awọn iṣẹ isediwon DNA genomic;Awọn ayẹwo iranran ẹjẹ yẹ ki o rii daju pe didara jẹ oṣiṣẹ ati akoko ipamọ ko yẹ ki o gun ju.
2. Lilo àsopọ pẹ diẹ le ja si ni ko si isediwon ti DNA genomic ti o baamu.
Iṣeduro: Tẹle awọn itọnisọna iṣapẹẹrẹ buccal swab ninu itọsọna iṣiṣẹ, ki o parẹ ni ọpọlọpọ igba bi o ti ṣee ṣe ki awọn sẹẹli ti o to le ni asopọ si swab oral fun isediwon DNA genomic;fun isediwon iranran ayẹwo ẹjẹ, agbegbe gige gige ẹjẹ le pọ si ni deede.
3. Foregene Protease ti wa ni ipamọ aiṣedeede, ti o fa idinku ninu iṣẹ rẹ tabi aiṣiṣẹ.
Iṣeduro: Jẹrisi awọn ipo ibi ipamọ ti Foregene Protease tabi rọpo rẹ pẹlu Foregene Protease tuntun fun iṣesi enzymatic.
4. Itọju aibojumu ti kit tabi akoko ipamọ ti gun ju, ti o mu ki ikuna diẹ ninu awọn paati ninu kit naa jẹ.
Iṣeduro: Ra ohun elo ipinya swab Buccal tuntun fun awọn ilana ti o jọmọ.
5. Buffer WB ko fi ethanol pipe kun.
Iṣeduro: Jẹrisi pe ifipamọ WB ṣe afikun iwọn didun to pe ti ethanol pipe.
6. Awọn eluent ko ni afikun daradara si fiimu silikoni.
Iṣeduro: Ṣafikun 65 °C tẹlẹ-gbona eluent silẹ si aarin awo awọ silikoni ki o lọ kuro ni iwọn otutu yara fun awọn iṣẹju 5 lati mu imudara elution pọ si.
DNA jinomiki ikore kekere ti ya sọtọ
Awọn idi wọnyi ti o ṣeeṣe jẹ bi wọnyi:
1. Itoju ti ko tọ ti awọn ayẹwo tabi ibi ipamọ fun igba pipẹ nyorisi ibajẹ DNA genomic.
Iṣeduro: Awọn swabs ẹnu ni o dara julọ ti a ṣe ayẹwo tuntun, ati pe awọn swabs ti a fipamọ ko yẹ ki o lo fun isediwon DNA jiini.
2. Ti iye ayẹwo ti ara ba kere ju, akoonu DNA genomic ti a jade yoo dinku.
Iṣeduro: Tẹle awọn ilana iṣapẹẹrẹ swab oral ninu itọsọna iṣiṣẹ, nu ni ọpọlọpọ igba bi o ti ṣee ṣe ki awọn sẹẹli ti o to le ni asopọ si swab ẹnu fun isediwon DNA jiini.
3. Foregene Protease ti wa ni ipamọ aiṣedeede, ti o fa idinku ninu iṣẹ rẹ tabi aiṣiṣẹ.
Iṣeduro: Jẹrisi awọn ipo ibi ipamọ ti Foregene Protease tabi rọpo rẹ pẹlu Foregene Protease tuntun fun iṣesi enzymatic.
4. Eluent isoro.
Iṣeduro: Lo Buffer EB fun elution;ti o ba nlo ddH2O tabi awọn eluents miiran, jẹrisi pe pH ti eluate wa laarin 7.0-8.5.
5. Awọn eluate ti wa ni ko tọ fi kun dropwise.
Iṣeduro: Ṣafikun awọn isubu eluent si aarin awo awọ silikoni ki o lọ kuro ni iwọn otutu yara fun awọn iṣẹju 5 lati mu imudara elution pọ si.
6. Awọn elution omi accumulates ju kekere.
Iṣeduro: Lo eluent fun elution DNA genomic bi o ṣe nilo ninu awọn itọnisọna, o kere ju 15 μl.
Kekere ti nw ti jinomiki DNA ya sọtọ
Iwa mimọ DNA jiini kekere le ja si ikuna tabi awọn abajade ti ko ni itẹlọrun ti awọn adanwo isale, gẹgẹbi: awọn enzymu ko le ge ṣii, PCR ko le gba ajẹku jiini ti iwulo, ati bẹbẹ lọ.
Awọn idi ti o ṣeeṣe jẹ bi wọnyi:
1. Heteroprotein idoti, RNA idoti.
Onínọmbà: A ko fọ ọwọn iwẹnumọ nipa lilo Buffer PW;Buffer PW w iwe ìwẹnu ni ko fo nipa lilo awọn ti o tọ centrifugal iyara.
Iṣeduro: Rii daju pe ko si ojoriro ni supernatant ṣaaju fifi ethanol kun;rii daju lati wẹ ọwọn iwẹnumọ gẹgẹbi awọn ilana, ati pe a ko le yọ igbesẹ yii kuro.
2. Idoti ion aimọ.
Onínọmbà: Buffer WB w ọwọn ìwẹnumọ ti yọkuro tabi fo ni ẹẹkan, ti o yọrisi ibajẹ ionic ti o ku.
Iṣeduro: Rii daju pe o wẹ Buffer WB ni igba 2 bi a ti ṣe itọnisọna lati yọ awọn ions iyokù kuro bi o ti ṣee ṣe.
3. RNA henensiamu kontaminesonu.
Onínọmbà: Awọn RNases ajeji ni a ṣafikun si ifipamọ;Iṣẹ iwẹ buffer PW ko tọ, ti o yọrisi awọn iyoku RNase, ni ipa lori awọn iṣẹ ṣiṣe idanwo RNA isalẹ, gẹgẹbi transcription in vitro.
Iṣeduro: Foregene jara awọn ohun elo ipinya acid nucleic acid le yọ RNA kuro laisi afikun afikun ti RNase, nitorinaa buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit nilo ko fi RNase kun;rii daju lati tẹle awọn ilana fun Buffer PW fifọ ọwọn, ati pe igbesẹ yii ko le yọkuro.
4. Ethanol aloku.
Onínọmbà: Buffer WB ko ṣe centrifugation tube ofo lẹhin fifọ ọwọn ìwẹnumọ.
Iṣeduro: Ṣe iṣẹ centrifugation tube ofo ti o tọ ni ibamu si awọn ilana naa.
5. Miiran aimọ idoti.
Onínọmbà: Awọn ayẹwo ti a fipamọ tabi awọn ayẹwo pataki ko ni iṣaaju.
Iṣeduro: Ṣe itọju ayẹwo daradara bi a ti kọ ọ.
