Ohun elo sẹẹli Taara RT qPCR-SYBR GREEN Mo Dari Ẹyin sẹẹli Lysis Ṣetan Igbesẹ kan-QRT-PCR Awọn ohun elo
Awọn apejuwe
Ohun elo yii nlo eto ifipamọ lysis alailẹgbẹ ti o le ṣe idasilẹ RNA ni kiakia lati awọn ayẹwo sẹẹli ti o gbin fun awọn aati RT-qPCR, nitorinaa imukuro akoko-n gba ati ilana isọdọmọ RNA alaapọn.Awoṣe RNA le gba ni iṣẹju 7 nikan.Awọn 5×Dapọ RT taara ati 2×Taara awọn reagents qPCR Mix-SYBR ti a pese nipasẹ ohun elo le yarayara ati imunadoko ni awọn abajade PCR pipo akoko gidi.
5×Dapọ RT taara ati 2×Taara qPCR Mix-SYBR ni ifarada inhibitor ti o lagbara, ati lysate ti awọn ayẹwo le ṣee lo bi awoṣe fun RT-qPCR taara.Ohun elo yii ni alailẹgbẹ RNA giga-ibarapọ Foregene yiyipada transcriptase, ati Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, saarin lenu, PCR optimizer ati amuduro.
Awọn pato
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Awọn paati ohun elo
| Apa I | Ifipamọ CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Apa II | DNA eraser |
| 5× Taara RT Mix | |
| 2× Taara qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX Itọkasi Dye | |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | |
| Awọn ilana | |
Awọn ẹya & awọn anfani
■Rọrun ati imunadoko: pẹlu imọ-ẹrọ Cell Direct RT, awọn ayẹwo RNA le gba ni iṣẹju 7 nikan.
■ Ibeere ayẹwo jẹ kekere, bi kekere bi awọn sẹẹli 10 le ṣe idanwo.
■ Imujade giga: o le ṣe awari RNA ni kiakia ninu awọn sẹẹli ti a gbin ni 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ Eraser DNA le yara yọ awọn genomes ti a ti tu silẹ, dinku pupọ ni ipa lori awọn abajade idanwo ti o tẹle.
■ Iṣapeye RT ati eto qPCR jẹ ki ifasilẹ ipadasẹhin-igbesẹ meji RT-PCR ṣiṣẹ daradara ati PCR ni pato diẹ sii, ati diẹ sii sooro si awọn inhibitors ifasẹyin RT-qPCR.
Ohun elo Kit
Dopin ti ohun elo: gbin ẹyin.
- RNA ti a tu silẹ nipasẹ lysis ayẹwo: nikan wulo si awoṣe RT-qPCR ti ohun elo yii.
- Ohun elo naa le ṣee lo fun awọn idi wọnyi: itupalẹ ikosile jiini, ijẹrisi ti ipa ipalọlọ jiini-ilaja siRNA, ibojuwo oogun, ati bẹbẹ lọ.
Aworan atọka
Ibi ipamọ ati igbesi aye Selifu
Apakan I ti kit yii yẹ ki o wa ni ipamọ ni 4 ℃;Apa II yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20 ℃.
Foregene Protease Plus II yẹ ki o wa ni ipamọ ni 4℃, ma ṣe di ni -20 ℃.
Reagent 2×Taara qPCR Mix-SYBR yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20℃ninu okunkun;ti o ba lo nigbagbogbo, o tun le wa ni ipamọ ni 4℃ fun ibi ipamọ igba kukuru (lo laarin awọn ọjọ 10).
Real Time PCR alakoko oniru agbekale
Siwaju Alakoko ati Yiyipada Alakoko
Fun Real Time PCR, apẹrẹ alakoko jẹ pataki pupọ.Awọn alakoko jẹ ibatan si pato ati ṣiṣe ti imudara PCR, ati pe o le ṣe apẹrẹ pẹlu itọkasi awọn ipilẹ wọnyi:
Alakoko ipari: 18-30bp.
GC akoonu: 40-60%.
Iye Tm: sọfitiwia apẹrẹ alakoko, gẹgẹbi alakoko 5, le fun iye Tm ti alakoko.Awọn iye Tm ti oke ati isalẹ awọn alakoko yẹ ki o wa ni isunmọ bi o ti ṣee ṣe.Ilana iṣiro Tm tun le ṣee lo: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nigbati o ba n ṣiṣẹ PCR, iwọn otutu ti o wa ni isalẹ iye Tm alakoko ti 5 °C ni a yan ni gbogbogbo bi iwọn otutu annealing (ilosoke ti o baamu ni iwọn otutu annealing le mu iyasọtọ ti iṣe PCR pọ si).
Awọn alakoko ati awọn ọja PCR:
Apẹrẹ alakoko PCR ipari ọja ipari jẹ pelu 100-150bp.
Awọn alakoko apẹrẹ ni agbegbe igbekalẹ Atẹle ti awoṣe yẹ ki o yago fun bi o ti ṣee ṣe.
Yago fun dida 2 tabi diẹ sii awọn ipilẹ ibaramu laarin awọn opin 3′ ti oke ati awọn alakoko isalẹ.
Alakoko 3′ ipilẹ ebute ko le wa pẹlu 3 afikun itẹlera G tabi C.
Awọn alakoko funrara wọn ko le ni awọn ẹya ibaramu, bibẹẹkọ eto irun ori kan yoo ṣẹda, ti o kan imudara PCR.
ATCG yẹ ki o pin kaakiri bi o ti ṣee ṣe ni ọna alakoko, ati ipilẹ ebute 3′ yẹ ki o yago fun bi T.
Àfikún 1: Cell Direct RT-qPCR Apo afikun paati
1.Cell Lysis Solusan
|
| |||
| Awọn paati ohun elo (24-daraga lysis eto / daradara) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| ApakanI | Ifipamọ CL | 20 milimita | 100 milimita |
| Foregene Protease Plus II | 400 milimita | 1 milimita × 2 | |
| Buffer ST | 1 milimita × 2 | 10 milimita | |
| ApakanII | DNA eraser | 400 milimita | 1 milimita × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Awọn paati ohun elo (20 μl eto esi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Taara RT Mix | 800 milimita |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita × 2 |
|
| ||
| Awọn paati ohun elo (20 μl eto esi) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Taara qPCR Mix-SYBR | 1 milimita × 2 | 1.7 milimita × 6 |
| 50× ROX Itọkasi Dye | 40 μl | 200 milimita |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita | 10 milimita |
Awọn itọnisọna itọnisọna:
