Apapọ Apapọ Ẹranko Ohun elo Ipinya RNA Lapapọ Iyọkuro RNA ati Awọn ohun elo Iwẹnumọ fun Awọn sẹẹli Ẹranko & Ẹnu
Apejuwe Apo:
Ni kiakia ati daradara jade ni mimọ-giga ati didara lapapọ RNA lati ọpọlọpọ awọn ẹran ara ẹranko.
Ko si ye lati ṣe aniyan nipa ibajẹ RNA.Gbogbo eto jẹ Ọfẹ RNase
Yọ DNA kuro ni imunadoko nipa lilo DNA-Cleaning Column
Yọ DNA kuro laisi fifi DNAse kun
Rọrun-gbogbo awọn iṣẹ ṣiṣe ti pari ni iwọn otutu yara
Yara-iṣiṣẹ le pari ni ọgbọn iṣẹju
Ailewu-ko si reagent Organic ti a lo
Iwa mimọ-OD260/280≈1.8-2.1
Kits Awọn apejuwe
Awọn igbaradi 50, Awọn igbaradi 200
Ohun elo yii nloomo ọwọn ati agbekalẹti o ni idagbasoke nipasẹ ile-iṣẹ wa, eyiti o le yọkuro ti o ga julọ ati didara lapapọ RNA lati orisirisi awọn ẹran ara eranko pẹlu ṣiṣe giga.Ọwọn RNA-nikan le di RNA daradara ati pe o le ṣe ilọsiwaju ni nigbakannaa pẹlu agbekalẹ alailẹgbẹ Ọpọlọpọ awọn ayẹwo.
Gbogbo eto jẹ RNase-ọfẹ, ki RNA ti a fa jade ko ni ibajẹ;Buffer RW1, Buffer RW2 eto fifọ saarin, ki RNA ti o gba jẹ ọfẹ ti amuaradagba, DNA, ion, ati idoti agbo-ara Organic.
Awọn paati ohun elo
| Animal Total RNA ipinya Apo | ||
| Awọn paati ohun elo | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Ifipamọ RL1* | 25ml | 100ml |
| Ifipamọ RL2 | 15ml | 60ml |
| Ifipamọ RW1* | 25ml | 100ml |
| Ifipamọ RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 10 milimita | 40ml |
| Ọwọn RNA-nikan | 50 | 200 |
| Ọwọn Isọmọ DNA | 50 | 200 |
| Ilana itọnisọna | 1 nkan | 1 nkan |
ọja alaye
| Ọna kika | omo ere | paati ìwẹnumọ | Foregene ọwọn, reagent |
| Flux | 1-24 awọn ayẹwo | Akoko fun igbaradi | ~ 30 iṣẹju (awọn ayẹwo 24) |
| Centrifuge | Iduro centrifuge | Pyrolysis Iyapa | Centrifugal Iyapa |
| Apeere | Ẹranko ẹran;sẹẹli | Awọn ayẹwo iye | Asọ: 10-20 mg;Ẹyin: (1-5)×106 |
| Elution iwọn didun | 50-200 μL | Iwọn ikojọpọ ti o pọju | 850 μL |
Awọn ẹya & awọn anfani
■ Ko si ye lati ṣe aniyan nipa ibajẹ RNA;gbogbo eto jẹ RNase-ọfẹ
■ Yọ DNA kuro daradara-lilo DNA-Cleaning Column
■ Yọ DNA kuro lai fi DNAse kun
■ Rọrun-gbogbo awọn iṣẹ ṣiṣe ti pari ni iwọn otutu yara
■ Ṣiṣe-yara le pari ni ọgbọn išẹju 30
■ Ailewu-ko si reagenti Organic ti o nilo
■ Giga ti nw -OD260 / 280≈1.8-2.1
Ohun elo Kit
O dara fun isediwon ati ìwẹnumọ ti lapapọ RNA lati ọpọlọpọ awọn ẹran ara tuntun tabi tutunini tabi awọn sẹẹli gbin.
Ọja sile
■ Awọn ohun elo ti o wa ni isalẹ: iṣakojọpọ cDNA akọkọ-okun, RT-PCR, cloning molikula, Northern Blot, ati bẹbẹ lọ.
■ Awọn ayẹwo: awọn ẹran ara ẹranko, awọn sẹẹli ti a gbin
■ Iwọn lilo: Tissues 10-20mg, Awọn sẹẹli (2-5) × 106
■ O pọju agbara abuda DNA ti ọwọn ìwẹnumọ: 80 μg
■ Iwọn didun: 50-200 μl
Aworan atọka
Eranko Total RNA ipinya Apo itọju 20mg
Awọn ayẹwo Asin titun, mu 5% ti a sọ di mimọ lapapọ RNA 1% agar
Glycogel electrophoresis
1: Ọkàn 2: Àrùn
3: Ẹdọ 4: Okan
Ibi ipamọ ati igbesi aye selifu
Ohun elo naa le wa ni ipamọ fun oṣu 24 ni iwọn otutu yara (15–25 ℃) tabi 2–8 ℃ fun igba pipẹ.Buffer RL1 le wa ni ipamọ ni 4 ℃ fun oṣu kan lẹhin fifi β-mercaptoethanol kun (aṣayan).
Toka ìwé
1.TI: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., ati al.mRNA-Ti kojọpọ Lipid-Bi awọn ẹwẹ ara fun Ṣiṣatunṣe Ipilẹ Ẹdọ Nipasẹ Imudara ti Apẹrẹ Apapo Aarin.Adv.Iṣẹ.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.Ti: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Apoptosis lẹẹkọkan ti awọn sẹẹli ni igbaradi sẹẹli yio ṣe itọju awọn ipa immunomodulatory nipasẹ itusilẹ ti phosphatidylserine.Ifojusi Iyipada ifihan agbara Ther.Ọdun 2021 Oṣu Keje 14;6 (1):270.doi: 10.1038 / s41392-021-00688-z.
3.BI:17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, ati al.N7-Methylguanosine tRNA iyipada ṣe alekun itumọ mRNA oncogenic ati ṣe igbega ilọsiwaju cholangiocarcinoma intrahepatic.Mol Cell.2021 Jul 29: S1097-2765 (21)00555-4.doi: 10.1016 / j.molcel.2021.07.003.
4.BI:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, ati al.Mettl14-Mediated m6A Iyipada Ṣe Atunse Ẹdọ Rọ nipasẹ Mimu Endoplasmic Reticulum Homeostasis.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12 (2): 633-651.doi: 10.1016 / j.jcmgh.2021.04.001.
Awọn ohun elo ipinya RNA fun awọn orisun apẹẹrẹ miiranwa:
Awọn sẹẹli, ọgbin, gbogun ti, ẹjẹ, ati bẹbẹ lọ.
A ko yọ RNA jade tabi awọn ikore RNA kere
Nigbagbogbo ọpọlọpọ awọn ifosiwewe ti o ni ipa ṣiṣe imularada, gẹgẹbi: akoonu RNA ayẹwo ti ara, ọna ṣiṣe, iwọn didun elution, ati bẹbẹ lọ.
1. Ice wẹ tabi cryogenic (4 ° C) centrifugation ti a ṣe nigba isẹ.
Iṣeduro: Ṣiṣẹ ni iwọn otutu yara (15-25 ° C) jakejado gbogbo ilana, ma ṣe iwẹ yinyin ati centrifuge ni awọn iwọn otutu kekere.
2. Itọju apẹẹrẹ ti ko tọ tabi akoko ipamọ ayẹwo ti o pọju.
Iṣeduro: Tọju awọn ayẹwo ni -80 °C tabi di ninu omi nitrogen ati yago fun lilo didi-diẹ leralera;gbiyanju lati lo àsopọ titun tabi awọn sẹẹli ti o gbin fun isediwon RNA.
3. Ayẹwo lysis ti ko to.
Iṣeduro: Nigbati o ba n ṣe isokan, rii daju pe àsopọ ti wa ni isokan ti o to ati pe awọn sẹẹli tisọ ti pin ni kikun lati ṣe alaye itusilẹ ti RNA.
4. A ko fi eluent kun daradara.
Iṣeduro: Jẹrisi pe RNase-Ọfẹ ddH2O ti wa ni afikun dropwise si arin ti awọn awo iwe iwe ìwẹnumọ.
5. Iwọn ti o pe ti ethanol pipe ko ni afikun si Buffer RL2 tabi Buffer RW2.
Iṣeduro: Tẹle awọn itọnisọna, ṣafikun iwọn didun to pe ti ethanol pipe si Buffer RL2 ati Buffer RW2 ki o dapọ daradara ṣaaju lilo ohun elo naa.
6. Tissue sample doseji ko yẹ.
Iṣeduro: Lo 10-20 mg ti àsopọ tabi (1-5) × 106awọn sẹẹli fun 500 μl saarin RL1, bi lilo àsopọ ti o pọ julọ le ja si idinku RNA ti o dinku.
7. Iwọn didun elution ti ko tọ tabi elution ti ko pari.
Iṣeduro: Iwọn elution ti iwe-mimọ jẹ 50-200 μl;ti ipa elution ko ba ni itẹlọrun, o gba ọ niyanju lati fa akoko gbigbe iwọn otutu yara lẹhin fifi RNase-ọfẹ ddH ti o ti ṣaju tẹlẹ.2O, fun apẹẹrẹ fun awọn iṣẹju 5-10.
8.The ìwẹnumọ iwe ni o ni ethanol aloku lẹhin Buffer RW2 w.
Iṣeduro: Ti iyọkuro ethanol ba wa lẹhin fifọ Buffer RW2, centrifugation tube ofo fun iṣẹju 1, akoko fun iṣẹ centrifugation tube ofo le pọ si iṣẹju 2, tabi iwe iwẹnu le gbe ni iwọn otutu yara fun iṣẹju 5 lati yọ ethanol ti o ku kuro ni deede.
RNA ti a sọ di mimọ ti bajẹ
Didara ti RNA ti a sọ di mimọ jẹ ibatan si awọn nkan bii titọju apẹẹrẹ, ibajẹ RNase, ati ifọwọyi, ati bẹbẹ lọ.
1. Awọn ayẹwo ti ara ko ni pa ni akoko.
Iṣeduro: Ti a ko ba lo awọn ayẹwo ara tabi awọn sẹẹli ni akoko ti o yẹ lẹhin gbigba, lẹsẹkẹsẹ cryopreserve ni -80 °C tabi nitrogen olomi.Lati yọ RNA jade, lo àsopọ tuntun tabi ayẹwo sẹẹli nigbakugba ti o ṣee ṣe.
2. Tun didi-thawing ti awọn ayẹwo àsopọ.
Iṣeduro: Nigbati o ba tọju awọn ayẹwo ti ara, o dara julọ lati ge wọn si awọn ege kekere fun itoju, ki o yọ ọkan ninu awọn ege naa kuro nigba lilo wọn lati yago fun didi didi ti ayẹwo ati ibajẹ ti RNA.
3. RNase ti ṣafihan tabi ko wọ awọn ibọwọ isọnu, awọn iboju iparada, ati bẹbẹ lọ lakoko iṣẹ naa.
Iṣeduro: Awọn adanwo isediwon RNA ni a ṣe dara julọ ni awọn yara ifọwọyi RNA lọtọ ati pe tabili ti sọ di mimọ ṣaaju idanwo naa.
Wọ awọn ibọwọ isọnu ati awọn iboju iparada lakoko idanwo lati dinku ibajẹ RNA ti o fa nipasẹ ifihan RNase.
4. Reagents ti wa ni ti doti pẹlu RNase nigba lilo.
Iṣeduro: Rọpo pẹlu Apo Ipinya Apapọ RNA Ẹranko tuntun fun awọn adanwo ti o jọmọ.
5. Awọn tubes centrifuge, awọn imọran, ati bẹbẹ lọ ti a lo ninu ifọwọyi RNA ti doti pẹlu RNase.
Iṣeduro: Jẹrisi pe awọn tubes centrifuge, awọn imọran, pipettes, ati bẹbẹ lọ ti a lo ninu isediwon RNA jẹ gbogbo RNase-ọfẹ.
RNA ti a sọ di mimọ yoo kan awọn adanwo ibosile
RNA ti sọ di mimọ nipasẹ ọwọn iwẹnumọ, ti awọn ions iyọ, akoonu amuaradagba ti tobi ju yoo ni ipa lori idanwo isalẹ, gẹgẹbi: transcription yiyipada, Northern Blot et al.
1. Awọn elutioned RNA ni iyọ ion iṣẹku.
Iṣeduro: Jẹrisi pe iwọn didun ti ethanol ti o pe ti ni afikun si Buffer RW2 ati ṣe awọn fifọ iwe-mimọ 2 ni iyara centrifugal ti a tọka fun iṣẹ;ti iyọkuro iyọ iyọ eyikeyi ba wa, lọ kuro ni iwe iwẹnumọ si Buffer RW2 fun iṣẹju 5 ni iwọn otutu yara ki o ṣe centrifugation lati mu yiyọkuro idoti iyọ pọ si.
2. Aloku Ethanol ni RNA elutioned.
Iṣeduro: Jẹrisi pe lẹhin fifọ RW2 fifọ, ṣe iṣiṣẹ centrifugation tube ofo ni iyara centrifugation ti a fihan fun iṣẹ, mu akoko iṣẹ centrifugation tube ti o ṣofo pọ si iṣẹju 2 ti aloku ethanol tun wa, tabi fi silẹ ni iwọn otutu yara fun iṣẹju 5 lẹhin centrifugation tube ofo lati mu imukuro ethanolize pọ si.
