Escherichia Coli O157: Apo Iwari Acid Nucleic Acid (Ọna Iwadii Fluorescent PCR/Lyophilization)
Apejuwe Apo:
Ologbo.No.FP103
A lo fun wiwa iyara ati ibojuwo ti E. coli O157: H7 ni ounjẹ, ifunni, awọn ayẹwo omi ati awọn apẹẹrẹ ayika.
Awọn apejuwe
O ti wa ni lilo funwiwa iyara ati ibojuwo ti E. coli O157:H7 ninu ounjẹ, ifunni, awọn ayẹwo omi ati awọn apẹẹrẹ ayika.
[Ilana idanwo]
Gẹgẹbi ilana ti imọ-ẹrọ PCR Fuluorisenti, awọn alakoko kan pato ati awọn iwadii Taqman jẹ apẹrẹ fun jiini pato ti Escherichia coli O157: H7, ati ti a rii nipasẹ ohun elo PCR fluorescent, ki o le rii wiwa Escherichia coli O157: H7 Qualitative erin ti DNA.
Awọn akoonu Kit
Akiyesi: Iwadi ikanni ROX ko si.
| Calagbara | Sipesifikesonu | Qiṣọkan |
| Buffer A | Tube | 1 |
| Ifipamọ B | Tube | 1 |
| Iṣakoso to dara | Tube | 1 |
| Iṣakoso odi | Tube | 1 |
O ti ṣe yẹ Lilo
O ti wa ni lilo fun wiwa iyara ati ibojuwo ti E. coli O157:H7 ninu ounjẹ, ifunni, awọn ayẹwo omi ati awọn apẹẹrẹ ayika.
Awọn ipo Ibi ipamọ Ati Ọjọ Ipari
Tọju ni -20℃ ninu okunkun ki o yago fun didi ati gbigbo leralera.
Akoko idaniloju jẹ 12osu, ati awọn gbóògì ọjọ ti han lori awọn lode apoti.
Irinse Ati Consumables
Ohun elo PCR pipo Fuluorisenti, ibon pipette ati awọn imọran ti o baamu, gbigbọn vortex, mini centrifuge.
Lilo
1. Ṣiṣe Ayẹwo
1.1 Iru Ayẹwo: Ohun elo yii jẹ o dara fun ounjẹ, ifunni, awọn ayẹwo omi ati awọn ayẹwo miiran ti a fura si pe o jẹ ibajẹ nipasẹ Escherichia coli O157: H7.Fun awọn ọja eran ti o jinlẹ, awọn ohun mimu ati awọn nkan miiran ti o ni awọn awọ, wọn nilo lati wẹ wọn lati yago fun ni ipa lori gbigba ifihan agbara fluorescence.
1.2 Ṣiṣe ayẹwo: Tọkasi si "GB 4789.10-2016 Aabo Ounje National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" fun igbaradi ayẹwo, asa imudara ati ipinya ti Escherichia coli O157: H7.
- Nucleic acid isediwon
Mu 20 milimita ti ojutu imudara ni tube centrifuge 1.5 milimita, ṣafikun 200 μL ti microbial lysate (ohun elo afikun ni a nilo), vortex fun awọn aaya 30, centrifuge ni ṣoki, ati ṣeto si apakan.
Awọn akiyesi: Iyọkuro ti nucleic acid lati lysate yẹ ki o pari laarin awọn iṣẹju 10, ati pe ko le wa ni ipamọ fun igba pipẹ.
3. Imudara Acid Nucleic
3.1 Tan ohun elo PCR pipo Fuluorisenti fun lilo.
Buffer A ati Buffer B lati inu ohun elo, yo wọn daradara, ati centrifuge ni ṣoki.Ṣafikun 18 μL Buffer A ati 2 μL Buffer B si ọpọn ifura PCR kọọkan.Lẹhinna ṣafikun 5 milimita ọkọọkan ti iṣakoso odi, acid nucleic ti a fa jade, ati iṣakoso rere sinu awọn ọpọn ifa PCR, fila awọn tubes, ati centrifuge ni ṣoki.
3.3 Gbigbe tube ifa PCR si ẹrọ PCR fluorescent, ati lo awọn ilana wọnyi lati ṣe awọn idanwo ampilifaya: yan 25 milimita fun eto ifaseyin, gba awọn ifihan agbara fluorescence ni 60 ° C fun ọmọ kọọkan, ati yan FAM fun ikanni wiwa.
| Igbesẹ | Eto | Nọmba ti iyika |
| 1 | 37 ℃ 5 iṣẹju | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 iṣẹju | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 40 |
| 60℃ 30s (gba fluorescence) |
Awọn itọnisọna fun itupalẹ awọn iṣoro
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Ko si RNA ti o le jade tabi ikore ti acid nucleic ti lọ silẹ
Nigbagbogbo ọpọlọpọ awọn ifosiwewe ti o ni ipa ṣiṣe imularada, gẹgẹbi: akoonu RNA ayẹwo, ọna ti iṣẹ, iwọn didun elution, ati bẹbẹ lọ.
Onínọmbà ti awọn idi ti o wọpọ:
1.Ice iwẹ tabi kekere-otutu (4 ° C) centrifugation nigba isẹ ti.
Imọran: Iwọn otutu yara (15-25 ° C) iṣẹ, ko iwẹ yinyin ati iwọn kekere centrifuge.
2. Ibi ipamọ ayẹwo ti ko tọ tabi ibi ipamọ ayẹwo fun igba pipẹ.
Imọran: Tọju awọn ayẹwo ni -80 ° C tabi di ninu omi nitrogen, ki o yago fun lilo di-diẹ leralera;gbiyanju lati lo awọn ayẹwo titun ti a gba fun isediwon RNA.
3.Insufficient ayẹwo lysis
Iṣeduro: Jọwọ rii daju pe ayẹwo ati ojutu iṣiṣẹ (Linear Acrylamide) ti dapọ daradara ati ki o wa ni idapo fun iṣẹju 10 ni iwọn otutu yara (15-25 ° C)
4.The eluent ti a fi kun ti ko tọ
Iṣeduro: Rii daju pe RNase-Ọfẹ ddH2O ti wa ni afikun si aarin awo ti ọwọn ìwẹnumọ
5.Iwọn aiṣedeede ti ethanol anhydrous ni Buffer viRW2
Imọran: Jọwọ tẹle awọn itọnisọna naa, ṣafikun iwọn didun to pe ti ethanol anhydrous si Buffer viRW2 ki o da wọn pọ daradara ṣaaju lilo ohun elo naa.
6.Iṣamulo apẹẹrẹ ti ko tọ.
Imọran: 200µl ti ayẹwo fun 500μl ti Buffer viRL.Iwọn ayẹwo ti o pọ julọ yoo ja si ni idinku oṣuwọn isediwon RNA.
7.Iwọn iwọn didun elution ti ko tọ tabi ti ko pari.
Imọran: Iwọn eluent ti iwe mimọ jẹ 30-50μl;ti ipa elution ko ba ni itẹlọrun, o gba ọ niyanju lati ṣafikun RNase-Free ddH ti o ti gbona tẹlẹ.2Eyin ati ki o fa akoko gbigbe ni iwọn otutu yara, bii 5-10min
8.Purification iwe ni o ni ethanol aloku lẹhin rinsing ni Buffer viRW2.
Imọran: Ti ethanol ba wa lẹhin ti o fi omi ṣan ni Buffer viRW2 ati centrifugation tube ofo fun iṣẹju meji 2, ọwọn iwẹnumọ le fi silẹ ni iwọn otutu yara fun 5min lẹhin centrifugation tube ofo lati yọ ethanol ti o ku ni kikun kuro.
Idibajẹ ti awọn ohun elo RNA mimọ
Didara RNA ti a sọ di mimọ jẹ ibatan si awọn nkan bii ibi ipamọ ayẹwo, ibajẹ RNase, ati iṣẹ.
Onínọmbà ti awọn idi ti o wọpọ:
1.Awọn ayẹwo ti a gba ko ni ipamọ ni akoko.
Imọran: Ti a ko ba lo ayẹwo ni akoko lẹhin gbigba, jọwọ tọju rẹ ni -80 ℃ tabi nitrogen olomi lẹsẹkẹsẹ.Fun isediwon ti awọn ohun elo RNA, gbiyanju lati lo awọn ayẹwo ti a gba tuntun nigbakugba ti o ṣeeṣe.
2.Collected samples won didi ati thawing leralera.
Imọran: Yago fun didi leralera ati thawing (ko si ju ẹẹkan lọ) lakoko gbigba ayẹwo ati ibi ipamọ, bibẹẹkọ ikore ti acid nucleic yoo dinku.
3.RNase ni a ṣe ni yara iṣiṣẹ tabi ko si awọn ibọwọ isọnu, awọn iboju iparada, ati bẹbẹ lọ ti a wọ.
Imọran: Iyọkuro awọn ohun elo RNA ṣe idanwo dara julọ ni yara iṣẹ ṣiṣe RNA lọtọ, ati pe tabili idanwo naa ti di mimọ ṣaaju idanwo naa.Wọ awọn ibọwọ isọnu ati awọn iboju iparada lakoko idanwo lati yago fun ibajẹ RNA ti o fa nipasẹ ifihan RNase.
4.The reagent ti doti nipasẹ RNase nigba lilo.
Aba: Rọpo pẹlu Apo Ipinya RNA Viral tuntun fun awọn adanwo ti o jọmọ.
5.The RNase kontaminesonu ti centrifuge tubes, pipette awọn italolobo, ati be be lo Aba: Rii daju wipe awọn centrifuge tubes, pipette awọn italolobo, ati pipettes ni gbogbo RNase-Free.
Awọn ohun elo RNA ti a sọ di mimọ kan awọn adanwo isalẹ
Awọn ohun elo RNA ti a sọ di mimọ nipasẹ ọwọn iwẹnumọ yoo ni ipa lori awọn adanwo isalẹ ti awọn ions iyọ tabi awọn ọlọjẹ pupọ ba wa, gẹgẹbi: transcription yiyipada, Northern Blot, ati bẹbẹ lọ.
1.There ni o wa ti o ku iyọ ions ninu awọn eluted RNA moleku.
Iṣeduro: Rii daju pe iwọn didun to tọ ti ethanol anhydrous ti wa ni afikun si Buffer viRW2, ki o fọ ọwọn iwẹnumọ lẹẹmeji ni ibamu si iyara centrifugation ti o tọ lori awọn ilana ṣiṣe; Ti awọn ions iyọ ba tun ku, o le ṣafikun Buffer viRW2 si iwe iwẹnumọ, ki o fi silẹ ni iwọn otutu yara fun iṣẹju 5.Lẹhinna ṣe centrifugation lati yọ idoti ions iyọ kuro ni iwọn ti o tobi julọ
2.There ni o wa ethanol ti o ku ninu awọn ohun elo RNA eluted
Imọran: ni kete ti ifẹsẹmulẹ pe awọn ọwọn iwẹnumọ ti fọ nipasẹ Buffer viRW2, ṣe centrifugation tube ofo ni ibamu si iyara centrifugal lori awọn ilana iṣẹ.Ti ethanol ba tun wa, o le fi silẹ fun awọn iṣẹju 5 ni iwọn otutu yara lẹhin centrifugation tube ti o ṣofo lati yọ ethanol ti o ku si iwọn nla julọ.
Awọn itọnisọna itọnisọna:
Gbogun ti RNA ipinya Apo Afowoyi
