(96-daradara) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Apo – SYBR Green I
Awọn apejuwe
Awọn(96-daradara) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Apo–SYBR alawọ ewe Ipesea oto lysis saarin etoto ni kiakia tu RNAlati gbin cellawọn ayẹwo fun awọn aati RT-qPCR, imukuro akoko n gba ati alaapọnIlana ìwẹnumọ RNA, ati pe o gba to iṣẹju 7 nikan lati gba awoṣe RNA ti o nilo.Awọn5× Taara RT Mixati2× Taara qPCR Mix-SYBRpese ninu apoti le ni kiakia atife ni gba gidi-akoko pipoAwọn abajade PCR.
5 × Direct RT Mix ati 2 × Direct qPCR Mix-SYBR ni ifarada inhibitor ti o lagbara, ati pe o le lo lysate ti apẹẹrẹ lati ṣe idanwo bi awoṣe fun iyipada iyipada daradara ati imudara pato.Reagent naa ni Foregene oto Reverse Transcriptase pẹlu isunmọ giga fun RNA, bakanna bi Gbona D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , Ififunni ifarabalẹ, PCR optimizer and stabilizer , ati pe o le ṣee lo ni apapo pẹlu ifasilẹ lysis lati ṣawari ayẹwo ni kiakia, ni irọrun ati deede, ati pe o ni awọn abuda ti ifamọ giga, iyasọtọ ti o lagbara ati iduroṣinṣin to dara.
Awọn kit ti wa ni Eleto ni bulọọgi-eto lysis ti 96-daradara gbin ẹyin, ati ki o ni o dara uniformity ati aitasera;Awọn ohun elo ohun elo pese awọn aati 96 lysis, awọn aati transcription 96 ati awọn aati 96 × 2 qPCR, eyiti o le pade awo sẹẹli 96-daradara fun lilo akoko kan, yago fun idoti ti o ṣẹlẹ nipasẹ ṣiṣi ti o tun, didi ati thawing ti awọn reagents ati ibajẹ ti iṣẹ reagent.
Awọn paati ohun elo
| Akopọ Kit ( 50 μL lysis eto / 20 μLRT ifaseyin eto /20μL qPCR lenu eto) | DRT-03011 | Akiyesi | |
| 96T | |||
| ApakanI | IfipamọCL | 5 milimita | Ẹyin sẹẹliLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| IfipamọST | 500 μL | ||
| Apakan II | DNAApanirun | 100 μL | |
| 5× Taara RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Taara qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Itọkasi Dye | 400µL | ||
| RNase- ỌfẹddH2 O | 1.7ml |
| |
| Mlododun | 1 nkan | 1 sìn | |
*: Awọn lysis reagent DNA eraser wa ninu Apá II ti awọn kit;Cell Lysis, RT, ati awọn paati qPCR le ṣee ra lọtọ.
Awọn ẹya & awọn anfani
■Rọrun ati imunadoko: pẹlu imọ-ẹrọ Cell Direct RT, awọn ayẹwo RNA le gba ni iṣẹju 7 nikan.
■ Ibeere ayẹwo jẹ kekere, bi kekere bi awọn sẹẹli 10 le ṣe idanwo.
■ Imujade giga: o le ṣe awari RNA ni kiakia ninu awọn sẹẹli ti a gbin ni 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ Eraser DNA le yara yọ awọn genomes ti a ti tu silẹ, dinku pupọ ni ipa lori awọn abajade idanwo ti o tẹle.
■ Iṣapeye RT ati eto qPCR jẹ ki ifasilẹ ipadasẹhin-igbesẹ meji RT-PCR ṣiṣẹ daradara ati PCR ni pato diẹ sii, ati diẹ sii sooro si awọn inhibitors ifasẹyin RT-qPCR.
Ohun elo Kit
Dopin ti ohun elo: gbin ẹyin.
- RNA ti a tu silẹ nipasẹ lysis ayẹwo: nikan wulo si awoṣe RT-qPCR ti ohun elo yii.
- Ohun elo naa le ṣee lo fun awọn idi wọnyi: itupalẹ ikosile jiini, ijẹrisi ti ipa ipalọlọ jiini-ilaja siRNA, ibojuwo oogun, ati bẹbẹ lọ.
Ibi ipamọ ati igbesi aye Selifu
Apa I ti kit yii yẹ ki o wa ni ipamọ ni 4℃;Apa II yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20 ℃.
Foregene Protease Plus II yẹ ki o wa ni ipamọ ni 4℃, ma ṣe di ni -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20℃ninu okunkun;ti o ba lo nigbagbogbo, o tun le wa ni ipamọ ni 4℃ fun ibi ipamọ igba kukuru (lo laarin awọn ọjọ 10).
Real Time PCR alakoko oniru agbekale
Siwaju Alakoko ati Yiyipada Alakoko
Fun Real Time PCR, apẹrẹ alakoko jẹ pataki pupọ.Awọn alakoko jẹ ibatan si pato ati ṣiṣe ti imudara PCR, ati pe o le ṣe apẹrẹ pẹlu itọkasi awọn ipilẹ wọnyi:
- Alakoko ipari: 18-30bp.
- GC akoonu: 40-60%.
- Iye Tm: sọfitiwia apẹrẹ alakoko, gẹgẹbi alakoko 5, le fun iye Tm ti alakoko.Awọn iye Tm ti oke ati isalẹ awọn alakoko yẹ ki o wa ni isunmọ bi o ti ṣee ṣe.Ilana iṣiro Tm tun le ṣee lo: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nigbati o ba n ṣiṣẹ PCR, iwọn otutu ti o wa ni isalẹ iye Tm alakoko ti 5 °C ni a yan ni gbogbogbo bi iwọn otutu annealing (ilosoke ti o baamu ni iwọn otutu annealing le mu iyasọtọ ti iṣe PCR pọ si).
- Awọn alakoko ati awọn ọja PCR:
- Apẹrẹ alakoko PCR ipari ọja ipari jẹ pelu 100-150bp.
- Awọn alakoko apẹrẹ ni agbegbe igbekalẹ Atẹle ti awoṣe yẹ ki o yago fun bi o ti ṣee ṣe.
- Yago fun dida 2 tabi diẹ sii awọn ipilẹ ibaramu laarin awọn opin 3′ ti oke ati awọn alakoko isalẹ.
- Alakoko 3′ ipilẹ ebute ko le wa pẹlu 3 afikun itẹlera G tabi C.
- Awọn alakoko funrara wọn ko le ni awọn ẹya ibaramu, bibẹẹkọ eto irun ori kan yoo ṣẹda, ti o kan imudara PCR.
- ATCG yẹ ki o pin kaakiri bi o ti ṣee ṣe ni ọna alakoko, ati ipilẹ ebute 3′ yẹ ki o yago fun bi T.
Àfikún1:Cell DirectRT-qPCR Apo kompont afikun akopọ
1.Cell Lysis Solusan
| Cell Lysis Solusan | |||
| Awọn paati ohun elo (24-daraga lysis eto / daradara) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| ApakanI | Ifipamọ CL | 20 milimita | 100 milimita |
| Foregene Protease Plus II | 400 milimita | 1 milimita × 2 | |
| Buffer ST | 1 milimita × 2 | 10 milimita | |
| ApakanII | DNA eraser | 400 milimita | 1 milimita × 2 |
| Apapo RT | |
| Awọn paati ohun elo (20 μl eto esi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Taara RT Mix | 800 milimita |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita × 2 |
| qPCR Apapo | ||
| Awọn paati ohun elo (20 μl eto esi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Taara qPCR Mix-Taqman | 1 milimita × 2 | 1.7 milimita × 6 |
| 20× ROX Itọkasi Dye | 40 μl | 200 milimita |
| RNase-Ọfẹ ddH2O | 1.7 milimita | 10 milimita |
Awọn itọnisọna itọnisọna:
