Taara RT-qPCR Apo II
Apejuwe Apo:
◮Apo RT-qPCR Taara, ni lilo Foreasy Reverse Transcriptase ati Foreasy HS Taq DNA Polymerase ti o dagbasoke nipasẹ Foregene, pẹlu ifipamọ ifa alailẹgbẹ, jẹ ki kit yii pẹlu resistance to lagbara ati ibaramu, ati pe o le ṣe idanwo esi taara lilo Foregene Lysis eto bi awoṣe.Ohun elo yii le waye fun ohun elo wiwa nucleic acid COVID-19 ati idagbasoke ohun elo wiwa acid nucleic miiran.
Apejuwe
Apo RT-qPCR Taara n pese ifipamọ RT-qPCR ti o ni ẹyọkan, ti o ga julọ Foreasy HS Taq DNA Polymeraseati Tiransikiripiti Yiyipada Foreasy (MMLV),ṣiṣe ni irọrun fun ṣiṣẹda awọn ohun elo ẹhin-ipari ati atunṣe eto, laarin iṣeduro ti o rọrun.
Apo RT-qPCR Taara, ni lilo Foreasy Reverse Transcriptase ati Foreasy HS Taq DNA Polymerase ti o dagbasoke nipasẹ Foregene, pẹlu ifipamọ ifa alailẹgbẹ, jẹ ki kit yii pẹlu resistance to lagbara ati ibaramu, ati pe o le ṣe idanwo esi taara lilo Foregene Lysis eto bi awoṣe.Ohun elo yii le waye fun ohun elo wiwa nucleic acid COVID-19 ati idagbasoke ohun elo wiwa acid nucleic miiran.
Ohun elo yii le taara jẹ paati ti ọja IVD, ni irọrun ati iyara.O nilo iṣeduro irọrun nikan, laisi idagbasoke lẹẹkansi.
Awọn pato
500T, 50,000T
Awọn paati ohun elo
| Awọn akoonu inu ohun elo (20 μL eto esi) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50,000 T | |
| Iṣaaju Rgbogbo Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 milimita×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 milimita×10 |
| 2× Taara RT-qPCRIfipamọ | 1 milimita ×5 | 500 milimita ×1 |
| Ilana | 1 | 1 |
Awọn Igbesẹ Ṣiṣẹ
A: Mura awoṣe ati reagent
1. Mura awoṣe RNA ti a pese silẹ (A ṣe iṣeduro lati lo ohun elo Foregene Total RNA Isolation Kit jara lati yọ jade ati sọ awoṣe RNA di mimọ) tabi ọja fifọ ayẹwo (A ṣe iṣeduro lati lo Foregene Lysis eto), awọn alakoko kan pato (10 μM) ati awọn ohun elo miiran ti o yẹ, ohun elo.
2. Fi 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O ati 20 × ROX Reference Dye (ti o ba nilo) sinu apoti pẹlu yinyin, ṣiṣe awọn wọnyi yo nipa ti ara, ati adalu rọra.
B: Mura eto RT-qPCR
Gba idaji iwọn didun ifasilẹ ifasilẹ ti eto ifaseyin (fun apẹẹrẹ, ti iwọn eto naa ba jẹ 20 μL, o nilo lati gba 10 μL 2 × Direct RT-qPCR Buffer). Funti o baamu iye ti henensiamu, a daba peM-MLV: 10-30 U/20 μL eto ifaseyin,TaqDNA polymerase:1-2 U / 20 μL lenu etoEyi ni imọran wa, o yẹ ki o ṣe idanwo ati ṣatunṣe rẹ), ṣafikun awoṣe RNA, awọn alakoko pato ati awọn iwadii, ati ṣafikun RNase-Ọfẹ ddH2O si 20 μL.Igbaradi pato ti eto ifaseyin RT-qPCR ni a le tọka si tabili 1 atẹle.
Table 1: Mura ti RT-qPCR eto
| Ẹya ara ẹrọ | Iwọn didun | Ifojusi ikẹhin |
| 2× Taara RT-qPCR saarin | 10 μL | 1× |
| Tirankirikirikiripiti Yiyipada iwaju (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Alakoko siwaju (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Yipada alakoko (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Iwadi (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Awoṣe (RNA tabi Lysate) | X μL | |
| 20× ROX Itọkasi Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Lapapọ Iwọn didun | 20 μL |
Akiyesi: Alakoko Siwaju ati Yiyipada Alakoko jẹ awọn ipilẹṣẹ kan pato ti jiini ibi-afẹde.Eto ti qPCR le ṣe atunṣe ni ibamu si adaṣe adaṣe ati awọn awoṣe PCR.A ṣeduro 400nM fun ifọkansi ikẹhin ti ọpọlọpọ awọn alakoko.Ṣatunṣe iwọn didun ti awọn alakoko pato ati awọn iwadii ni ibamu si ifọkansi ti a pese silẹ ati ifọkansi ikẹhin ti a ṣeduro, jọwọ.
1 *: Yan ifọkansi ikẹhin ti o yẹ ti Dye Reference ROX ni ibamu si awọn ohun elo PCR pipo oriṣiriṣi.Ifojusi Itọkasi Itọkasi ROX ti aipe ti awọn ohun elo PCR ti o wọpọ jẹ afihan ninu tabili atẹle:
| Awọn ohun elo PCR pipo | Ifojusi ikẹhin ti Dye Reference ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Igbese Ọkan,ati be be lo. | 1 × (fun apẹẹrẹ, ṣafikun 1μl 20 × ROX Dye Itọkasi ni eto ifaseyin 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Yara, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ati Mx4000, ati be be lo. | 0.5× (fun apẹẹrẹ, ṣafikun 0.5μl 20 × ROX Dye Itọkasi ni eto ifasilẹ 20 μL) |
| Roche PCR irinse, Bio-Rad PCR irinse, Eppendorf pipo PCR irinse, ati be be lo. | Laisi ROX Reference Dye |
Ibi ipamọ ati igbesi aye Selifu
Ohun elo naa yẹ ki o wa ni ipamọ ni -20 ± 5 ℃.O yẹ ki o wa ni ipamọ lẹsẹkẹsẹ ni firiji thermostatic -20 ℃.Akoko wiwulo jẹ ọdun 2 ti o ba wa ni fipamọ ni ipo ti o dara.
